皖儀科技離子色譜助力醫(yī)療健康檢測(cè)
引言：胱氨酸(Cystine）是人體必需的氨基酸,，能協(xié)助皮膚的形成,，且對(duì)解毒作用很重要,，借由減低身體吸收銅的能力，胱氨酸保護(hù)細(xì)胞免于銅中毒,。當(dāng)它被代謝時(shí),，會(huì)釋放硫酸，而硫酸會(huì)與其他物質(zhì)產(chǎn)生化學(xué)作用,，增加整個(gè)代謝系統(tǒng)的解毒功能,。此外，它輔助胰島素的供給,，胰島素是人體利用糖和淀粉所必需的,。也能促進(jìn)細(xì)胞氧化還原，使肝功能旺盛,，促進(jìn)白細(xì)胞增生,，阻止病原菌發(fā)育。但過量服用會(huì)有副作用,，主要臨床表現(xiàn)為尿路結(jié)石,。
胱氨酸尿（cystinuria）指尿中有大量胱氨酸，是一種比較常見的遺傳性疾病,，由腎小管胱氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)缺陷引起,。任何年齡均可發(fā)生，兒童多見,。本病多易形成尿路結(jié)石,，結(jié)石一般在膀胱中形成，臨床常表現(xiàn)為腎絞痛,、血尿,、發(fā)熱、尿頻,、尿急和尿痛,、腎功能不全等。本病尚無根治方法,，多采取對(duì)癥治療,，主要防治結(jié)石形成及其并發(fā)癥。
尿中過量胱氨酸可通過硝普鹽氰化物試驗(yàn)檢出,。色譜法和電泳可進(jìn)一步明確診斷結(jié)果,，提供準(zhǔn)確數(shù)據(jù)。色譜法常見測(cè)試胱氨酸的方法有液相色譜-質(zhì)譜法等,，本次采用的是離子色譜測(cè)試尿液中的胱氨酸,。
1 實(shí)驗(yàn)方法
1.1 測(cè)試條件
儀器：IC6600系列離子色譜儀配置柱后衍生模塊
色譜柱：陽離子分析柱
柱溫：30℃；
流速：分析泵流速：0.3mL/min；
柱后堿液流速：0.3mL/min
進(jìn)樣量：25μL,；
檢測(cè)器：安培檢測(cè)器
檢測(cè)模式：脈沖積分-金電極,，AAA，氨基酸
1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
淋洗液：甲烷磺酸溶液梯度淋洗,；
柱后堿液：300mM氫氧化鈉溶液：精密移取15.7mL50%氫氧化鈉溶液,，加入裝有超純水的1000mL塑料容量瓶中，加超純水定容至刻度,，過濾,，超聲，加氮?dú)獗Ｗo(hù),；
標(biāo)樣：L-胱氨酸,；
樣品：尿液；
標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：精密稱取胱氨酸0.1000g至100mLPMP材質(zhì)塑料容量瓶中,，加1mL鹽酸使其溶解,，再加水定容至刻度，混勻即得,。（濃度為1000mg/L）
1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
分別精密移取0.025mL,、0.05mL、0.10mL,、0.25mL,、0.50mL、1.00mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液,，置于6個(gè)100mL容量瓶中,，加超純水定容至標(biāo)線，混勻,，即得,。標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度梯度表見表1；
表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度梯度表
1.4 樣品溶液配制
正常尿液前處理：精密移取正常尿液1mL至100mL容量瓶中,加1mL鹽酸使其溶解,，再加水定容至刻度,，搖勻即得。樣品過RP柱以及濾膜后進(jìn)樣分析,。
模擬高胱氨酸病人尿液前處理：模擬濃度分別為300mg/L,、600mg/L、900mg/L,，并在4℃冷藏冰箱中過夜保存后進(jìn)行測(cè)試,。精密移取模擬尿液1mL至100mL容量瓶中，加1mL鹽酸使其溶解,，再加水定容至刻度,，搖勻即得,。樣品過RP柱以及濾膜后進(jìn)樣分析。
2 測(cè)試結(jié)果
2.1 空白測(cè)試
在測(cè)試前確保儀器穩(wěn)定以及系統(tǒng)已經(jīng)沖洗干凈,，需要進(jìn)行空白實(shí)驗(yàn),，按照“1.1“項(xiàng)測(cè)試條件進(jìn)行測(cè)試，得到梯度空白測(cè)試圖譜和純水測(cè)試圖譜,，由圖可見，空白測(cè)試圖譜與純水測(cè)試圖譜中均沒有出現(xiàn)干擾,。梯度空白測(cè)試圖譜見圖1,，純水測(cè)試圖譜見圖2。
圖1 梯度空白測(cè)試圖譜
圖2 純水測(cè)試圖譜
2.2 標(biāo)曲測(cè)試
標(biāo)準(zhǔn)曲線系列濃度見表1,，按照1.1的測(cè)試條件進(jìn)行測(cè)試,，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線譜圖多點(diǎn)重疊譜圖如圖3，待測(cè)離子在該色譜條件下標(biāo)準(zhǔn)曲線線性均大于0.999,，線性良好,，線性方程如下表2。
圖3 標(biāo)準(zhǔn)曲線譜圖多點(diǎn)重疊色譜圖
表2 線性方程
2.3 精密度測(cè)試
按照“1.1"項(xiàng)色譜條件,，分別連續(xù)注入數(shù)針0.5mg/L,、5mg/L、20mg/L胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣分析,，測(cè)得樣品圖譜見圖4,、圖5、圖6,。精密度測(cè)試數(shù)據(jù)見表3,。
圖4 0.5mg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)6針重復(fù)性圖譜
圖5 5mg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)6針重復(fù)性圖譜
圖6 20mg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)6針重復(fù)性圖譜
表3 樣品連續(xù)3針測(cè)試數(shù)據(jù)
2.4 樣品測(cè)試
按照“1.1"項(xiàng)色譜條件，連續(xù)注入數(shù)針樣品溶液和模擬樣品溶液（模擬600mg/L尿液樣品）進(jìn)樣分析,，樣品未檢出胱氨酸,，樣品重復(fù)性譜圖見圖7。模擬600mg/L尿液樣品樣品重復(fù)性譜圖見圖8,。模擬600mg/L尿液樣品樣品重復(fù)性結(jié)果及回收率見表4,。
圖7 樣品連續(xù)6針測(cè)試重疊色譜圖
圖8 模擬600mg/L尿液樣品連續(xù)6針重復(fù)性圖譜
表4 模擬600mg/L尿液樣品樣品重復(fù)性結(jié)果及回收率
3 結(jié)論
本次實(shí)驗(yàn)采用離子色譜脈沖安培-柱后衍生法測(cè)試尿液中的胱氨酸，測(cè)試方法簡單,，穩(wěn)定且不受干擾,，運(yùn)行時(shí)間短且重復(fù)性好，回收率滿足測(cè)試要求,。
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