諾譜新材料甲烷磺酸體系陽離子色譜柱測定乳粉中的膽堿
摘要：膽堿由 Adolph Strecker 于1849年從豬膽汁中分離得到，故又名膽素,，直至上世紀三十年代才逐步明確其營養(yǎng)價值和作用。膽堿在食品領(lǐng)域主要應用于在嬰幼兒配方食品和孕婦妊娠期及哺乳期食品中,，是嬰幼兒配方食品中必須添加的一種營養(yǎng)物質(zhì)。人體內(nèi)膽堿的主要源自于自身合成和食物獲取,，一般不會出現(xiàn)膽堿缺乏，但對于嬰幼兒來說,，其自身合成膽堿的能力有限，特別是在母乳不足的情況下,，其機體所需膽堿的來源主要是嬰幼兒配方食品,，故對嬰幼兒配方食品中膽堿含量的監(jiān)測具有重要意義。膽堿是堿性強度與氫氧化鈉相似的一種含氮的有機堿性化合物, 在水溶液中可以完全電離,。所以可以采用離子色譜法, 用陽離子交換柱測定膽堿的含量。本篇文章采用諾譜新材料甲烷磺酸體系陽離子MS-5C-P2型色譜柱對膽堿進行測試,，方法線性良好, 重復性穩(wěn)定, 適合奶粉中膽堿含量的日常檢測。
1 實驗部分
1.1 主要儀器與試劑
離子色譜儀：IC6200系列,，配備電導檢測器,、陽離子抑制器、自動進樣器AS3110系列,，皖儀科技公司。
分析柱：MS-5C-P2,4.6×250 mm,5μm,，諾譜；
保護柱：MS-5CG,，4×30 mm，諾譜,；
膽堿標準工作溶液：100mg/L；
一次性注射器（5mL）,；
水系微孔濾膜（0.45μm）；氣：高純氮氣（>99.99%）,；濃鹽酸（HCl）；甲烷磺酸溶液：15mmol/L,；C18固相萃取小柱；
1.2 溶液配制
1.2.1 系列標準工作溶液
依次精密移取膽堿標準工作溶液（100mg/L）0.20mL,、0.50mL、1.00mL,、2.50mL、5.00mL于一組100mL容量瓶中,，用15mmol/L甲烷磺酸溶液定容,，搖勻,，配制成膽堿的質(zhì)量濃度分別為下表的系列標準工作溶液。
標準曲線系列濃度梯度
1.2.2 檢出限溶液配制
精確移取膽堿標準工作溶液（100mg/L） 0.02mL于100mL容量瓶中,，用15mmol/L甲烷磺酸溶液定容,，搖勻，配制成膽堿的質(zhì)量濃度為0.02mg/L標準工作溶液,。
1.3 儀器工作條件
色譜柱：諾譜MS-5C-P2 ,4.6×250 mm,5μm；
保護柱：諾譜MS-5CG,4×30 mm,；
色譜柱溫度：40 ℃；
電導池溫度：45 ℃,；
淋洗液：26mM MSA ；
流速：1.0 mL／min ,；
抑制器電流：78mA ；
進樣體積：100 μL,。
1.4 樣品前處理
準確稱取2.5g（精確至0.0001g）半固態(tài)或固態(tài)試樣于50mL比色管中，加入1mol/L的鹽酸溶液25mL,，加蓋,，渦旋至試樣溶液中無結(jié)塊,，混勻后放入70℃±2℃水浴中水解3h（每30min搖一次）,。將水解液冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶并用水定容至刻度,，混勻待用,；將樣品稀釋適當倍數(shù)后采用過C18固相萃取柱處理及濾膜后進行檢測,。
2 結(jié)果與討論
2.1 分離度驗證
在1.3儀器工作條件相同的條件下，對混合標準溶液進行測定,，得到7種陽離子標準色譜圖如圖1所示。由圖1及表1可知,，7種離子峰形對稱，形狀尖銳,，各組分分離度良好,。
圖1 7種離子混合標準溶液檢測譜圖
表1 7種離子混合標準溶液檢測結(jié)果
2.2 標準曲線線性驗證
將1.2.1中配制的標準曲線系列工作溶液于系統(tǒng)中,，按
照1.3工作條件進行分析,，得到標準曲線譜圖多點重疊譜圖如圖2，線性圖見下圖3,，線性相關(guān)系數(shù)R為0.99981，線性良好,。
圖2 膽堿標準溶液線性重疊譜圖
圖3 膽堿線性
2.3 檢出限驗證
當固態(tài)或半固態(tài)試樣稱樣量為2.5g時,，方法檢出限為0.02mg/L，按照1.2.2中配制的膽堿標準工作溶液進行分析,，樣品的測試結(jié)果見下圖4及表2,，理論檢出限優(yōu)于標準方法檢出限,；
圖4 最低檢測濃度測試譜圖
表2 最低檢測濃度測試數(shù)據(jù)
2.4 重復性驗證
按照1.4樣品前處理方法的得到的樣品重復6次分析,，測試譜圖及數(shù)據(jù)見下圖5及表3,，保留時間的RSD值為0.132%,，峰面積的RSD值為0.211%；
圖5 樣品重復性測試譜圖
表3 樣品重復性測試數(shù)據(jù)
2.5 樣品檢測
樣品1：甄選配方羊奶粉在重復性條件下獲得兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值為算數(shù)平均值的1.04%，小于標準要求的10%,。
圖6 樣品1測試譜圖
表4 樣品1測試數(shù)據(jù)
總結(jié)：根據(jù)譜圖和數(shù)據(jù)顯示,，采用皖儀諾譜甲烷磺酸體系陽離子MS-5C-P2色譜柱進行測，定性定量重復性良好,，分析結(jié)果穩(wěn)定，測試條件可以應用于數(shù)據(jù)檢測,。
3 結(jié)論
本次采用皖儀科技離子色譜儀IC6200系列及諾譜甲烷磺酸體系陽離子MS-5C-P2,4.6×250mm,5μm型色譜柱對GB5413.20-2022食品安全國家標準 嬰幼兒食品和乳品中膽堿的測定進行系統(tǒng)適用性、標準曲線驗證,、檢出限驗證、分離度驗證,、重復性驗證,，測試結(jié)果峰型較好,，線性良好，分離度較好,，重復性滿足要求,，靈敏度高，完全滿足國標GB5413.20-2022食品安全國家標準 嬰幼兒食品和乳品中膽堿的測定的測試要求,。
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