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皖儀科技液相色譜檢測食品中的6種著色劑

摘要：本文參考GB 5009.35-2016標(biāo)準(zhǔn)建立了一種高效液相色譜法測定食品中6種著色劑（檸檬黃,、莧菜紅、胭脂紅,、日落黃,、亮藍(lán)和赤蘚紅）含量的分析方法。結(jié)果表明1.00-50.0μg/mL濃度范圍內(nèi)的線性決定系數(shù)R平方值均大于0.999,，具有良好線性,，符合實(shí)驗要求。6種著色劑峰分離度均大于3,，分離度良好,。6種著色劑的保留時間重復(fù)性小于0.1%,，峰面積重復(fù)性小于0.2%，測試重復(fù)性良好,。該方法準(zhǔn)確可靠,、靈敏度高，滿足測試需求,。

前言

著色劑又稱食品色素,，是以食品著色為主要目的，使食品賦予色澤和改善食品色澤的物質(zhì),。長期食用著色劑超標(biāo)的產(chǎn)品,，將危害消費(fèi)者的身體健康。食品中人工合成著色劑用聚酰胺吸附法或液-液分配法提取,，制成水溶液,，注入高效液相色譜儀，經(jīng)反相色譜分離,，根據(jù)保留時間定性和與峰面積比較進(jìn)行定量,。

1 實(shí)驗方法

1.1 儀器配置

          表1 高效液相色譜系統(tǒng)配置清單

1.2 測試條件

色譜柱：C18 5μm, 4.6×250mm；

柱溫：35℃,；

波長：254nm,；

流速：1.0 mL/min；

進(jìn)樣體積：10μL,；

流動相：A/B=0.02mol/L乙酸銨溶液/甲醇,；

洗脫方式：梯度洗脫。

              表2 梯度條件

1.3 設(shè)備及試劑,、耗材

試劑：檸檬黃(CAS:1934-21-0)；

日落黃(CAS:2783-94-0),；

亮藍(lán)(CAS:3844-45-9),；

胭脂紅(CAS:2611-82-7)；

莧菜紅(CAS:915-67-3),；

赤蘚紅(CAS:16423-68-0),；

甲醇：色譜純；

乙酸銨：分析純,；

設(shè)備：超聲脫氣裝置,；

耗材：濾膜：水相針式濾器（聚醚砜）0.45μm；

一次性無菌加液器：2mL 0.6*25mm1.

1.4 標(biāo)樣制備

1.4.1 著色劑混標(biāo)配制

分別準(zhǔn)確移取胭脂紅,，亮藍(lán),，日落黃，莧菜紅,，赤蘚紅標(biāo)準(zhǔn)溶液各1.0mL,，檸檬黃標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5mL于10mL容量瓶中,，用水定容至刻度，混勻,，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾,。配制成質(zhì)量濃度分別為胭脂紅、亮藍(lán),、日落黃,、莧菜紅標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為50.0μg/mL，25.0μg/mL的檸檬黃標(biāo)準(zhǔn)溶液,，10.0μg/mL的赤蘚紅標(biāo)準(zhǔn)溶液,。置于4℃冰箱中冷藏保存。

1.4.2 六種著色劑混標(biāo)系列校準(zhǔn)溶液

配制胭脂紅10μg/mL,亮藍(lán)50μg/mL,，日落黃25μg/mL,，莧菜紅25μg/mL，赤蘚紅25μg/mL,，檸檬黃5μg/mL不同濃度的混標(biāo)溶液,，加水定容至1ml。逐級稀釋,，配制成不同濃度梯度的6種著色劑混標(biāo)使用液,。

1.4.3 六種著色劑單標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

分別準(zhǔn)確移取胭脂紅，亮藍(lán),，日落黃,，莧菜紅，赤蘚紅標(biāo)準(zhǔn)溶液各1.0mL,，檸檬黃標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5mL于6個10mL容量瓶中,，分別用水定容至刻度，混勻,，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾,。配制成質(zhì)量濃度分別為胭脂紅、亮藍(lán),、日落黃,、莧菜紅標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為50.0μg/mL，25.0μg/mL的檸檬黃標(biāo)準(zhǔn)溶液,，10.0μg/mL的赤蘚紅標(biāo)準(zhǔn)溶液,。置于4℃冰箱中冷藏保存。

2 結(jié)果與討論

2.1 單標(biāo)定性及系統(tǒng)適用性

取1.4.3中6種著色劑單標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液和1.4.1中6種著色劑混標(biāo)溶液,，按照1.2的測試條件進(jìn)樣分析,，通過單標(biāo)定性確定混標(biāo)中不同著色劑出峰時間，譜圖如圖1所示,。通過混標(biāo)譜圖分析得到六個峰的分離度均大于3,，分離度良好,。

              圖1 單標(biāo)定性分析譜圖

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線取

1.4.2中6種著色劑混標(biāo)系列校準(zhǔn)溶液，按照1.2的測試條件進(jìn)樣分析,，以濃度為橫坐標(biāo),，峰面積為縱坐標(biāo)，采用外標(biāo)法建立工作曲線,。6種著色劑標(biāo)曲結(jié)果分別如圖2-7所示,。不同濃度曲線重疊譜圖如圖8所示。6種著色劑曲線的線性決定系數(shù)R平方值均大于0.999,，具有良好線性關(guān)系,，符合實(shí)驗要求。

         圖2 檸檬黃系列校準(zhǔn)曲線線性圖

          圖3 莧菜紅系列校準(zhǔn)曲線線性圖

          圖4 胭脂紅系列校準(zhǔn)曲線線性圖

          圖5 日落黃系列校準(zhǔn)曲線線性圖

          圖6 亮藍(lán)系列校準(zhǔn)曲線線性圖

         圖7 赤蘚紅系列校準(zhǔn)曲線線性圖

         圖8 六種著色劑校準(zhǔn)系列溶液重疊譜圖

2.3 重復(fù)性

取1.4.1中6種著色劑混標(biāo)溶液重復(fù)進(jìn)樣6次,，按照1.2的測試條件分別連續(xù)進(jìn)樣測定6次,，重復(fù)性色譜圖如圖9所示，根據(jù)測試結(jié)果可得,，6種著色劑的保留時間重復(fù)性小于0.1%,，峰面積重復(fù)性小于0.2%，測試重復(fù)性良好說明皖儀科技LC3300系列高效液相色譜儀具有良好的精密度,。

         圖9 六種著色劑混標(biāo)重復(fù)性疊加譜圖

3 結(jié)論

本文使用皖儀科技LC3300系列高效液相色譜儀對食品中的著色劑進(jìn)行了檢測,，結(jié)果表明1.00-50.0μg/mL濃度范圍內(nèi)的線性決定系數(shù)R平方值均大于0.999，具有良好線性,，符合實(shí)驗要求,。6種著色劑峰分離度均大于3，分離度良好,。6種著色劑的保留時間重復(fù)性小于0.1%,，峰面積重復(fù)性小于0.2%，測試重復(fù)性良好,。該方法準(zhǔn)確可靠,、靈敏度高，滿足測試需求,。