皖儀科技離子色譜法測(cè)定透明質(zhì)酸中的季銨鹽
引言
透明質(zhì)酸(Hyaluronic acid,，HA)，又稱玻尿酸，是一種酸性粘多糖,。透明質(zhì)酸以其獨(dú)特的分子結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)在機(jī)體內(nèi)顯示出多種重要的生理功能,，如潤滑關(guān)節(jié),，調(diào)節(jié)血管壁的通透性,，調(diào)節(jié)蛋白質(zhì),，水電解質(zhì)擴(kuò)散及運(yùn)轉(zhuǎn)，促進(jìn)創(chuàng)傷愈合等,。具有較高臨床價(jià)值的生化藥物,，廣泛應(yīng)用于各類眼科手術(shù)，如晶體植入,、角膜移植和抗青光眼手術(shù)等。還可用于治療關(guān)節(jié)炎和加速傷口愈合,。將其用于化妝品中,，能起到獨(dú)特的保護(hù)皮膚作用,，可保持皮膚滋潤光滑、細(xì)膩柔嫩,、富有彈性,，具有防皺、抗皺,、美容保健和恢復(fù)皮膚生理功能的作用。
透明質(zhì)酸是人體皮膚組成成分之一,，并且具有良好的保濕作用,，目前被廣泛用于第四代化妝品中，被譽(yù)為理想的天然保濕因子,，國際上添加HA的化妝品種類已從最初的膏霜、乳液,、化妝水,、精華素膠囊,、膜貼擴(kuò)展到溶液、粉餅,、口紅,、洗發(fā)護(hù)發(fā)劑,、摩絲等,，應(yīng)用日趨廣泛,。但天然透明質(zhì)酸存在穩(wěn)定性較差,，易發(fā)生降解和親水性過強(qiáng)等缺點(diǎn),，限制了其應(yīng)用,，因此通過對(duì)透明質(zhì)酸進(jìn)行修飾改性，從而實(shí)現(xiàn)新的生物活性和功能,，最常見的一種改性透明質(zhì)酸就是透明質(zhì)酸的季銨鹽,。季銨鹽作為常規(guī)的陽離子,，可以采用離子色譜進(jìn)行測(cè)試。
1 實(shí)驗(yàn)方法
1.1測(cè)試條件
儀器：IC6200系列離子色譜儀配置陽離子抑制器
色譜柱：陽離子分析柱柱溫：30℃,；
流速：1ml/min,；
進(jìn)樣量：25μL,；
檢測(cè)器：電導(dǎo)檢測(cè)器
1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
淋洗液：10mM 甲烷磺酸溶液等度淋洗,；
氯化鈉溶液：稱取7g氯化鈉，用水溶解并定容至100mL,配制成0.07g/mL的氯化鈉溶液,。
氫氧化鈉溶液：稱取氫氧化鈉4g,，用水溶解并定容至100mL,配制成1mol/L的氫氧化鈉溶液。
標(biāo)樣：2,3-二羥基丙基-三甲基氯化銨標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（純度97%）,；
鈉離子標(biāo)準(zhǔn)溶液：ρ（K+）=1000mg/L
銨根離子標(biāo)準(zhǔn)溶液：ρ（NH4+）=1000mg/L
樣品：客戶提供
標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：稱取0.0871g季銨鹽（2,3-二羥基丙基-三甲基氯化銨）,，用去離子水溶解并定容至50mL，濃度為1690mg/L。
1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
分別精密移取0.1ml,、0.2ml、0.4 ml,、0.6ml、0.8ml,、1.0ml標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，置于6個(gè)10mL容量瓶中,，加超純水定容至標(biāo)線，混勻,，即得,。標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度梯度表見表1；
表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度梯度表
1.4 樣品溶液配制
稱取待測(cè)樣品0.2139g于25mL容量瓶中,，加入2mL氫氧化鈉溶液，5mL水,，充分混勻后置于上45℃恒溫水解2h，水解完成后加入2mL氯化鈉溶液和10mL乙腈,，混勻,，放置室溫，隨后精確定容至刻度,，充分混合均勻,，待透明質(zhì)酸沉降后取上清液1mL，加入1mL氯化鈉溶液,、5mL乙腈,，用水定容至10mL，即得待測(cè)樣品溶液,。
2 測(cè)試結(jié)果
2.1 干擾實(shí)驗(yàn)測(cè)試
在前處理中可能引入的鈉離子和銨根離子,，需要進(jìn)行干擾實(shí)驗(yàn),。按照“1.1“項(xiàng)測(cè)試條件進(jìn)行測(cè)試,，得到干擾性測(cè)試圖譜，2,3-二羥基丙基-三甲基氯化銨在測(cè)試色譜條件下出峰良好,，且與前處理中可能引入的鈉離子和銨根離子保留時(shí)間差距明顯,，不會(huì)形成干擾。干擾性實(shí)驗(yàn)測(cè)試圖譜見圖1。
圖1 陰離子測(cè)試圖譜
2.2 標(biāo)曲測(cè)試
標(biāo)準(zhǔn)曲線系列濃度見表1,，按照1.1的測(cè)試條件進(jìn)行測(cè)試,，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線譜圖多點(diǎn)重疊譜圖如圖2，待測(cè)離子在該色譜條件下標(biāo)準(zhǔn)曲線線性均大于0.9999,，線性良好，線性方程如下表2,。
圖2 標(biāo)準(zhǔn)曲線譜圖多點(diǎn)重疊色譜圖
表2 陰離子線性方程
2.3 樣品測(cè)試
按照“1.1"項(xiàng)色譜條件,，連續(xù)注入數(shù)針樣品溶液進(jìn)樣分析，測(cè)得樣品圖譜見圖3,。連續(xù)3針測(cè)試數(shù)據(jù)見表3
圖3 樣品連續(xù)3針測(cè)試重疊圖譜
表3 樣品連續(xù)3針測(cè)試數(shù)據(jù)
3 結(jié)論
本次實(shí)驗(yàn)實(shí)現(xiàn)了在淋洗液體系中不加入乙腈相條件下的有效色譜分離與定性,，避免了有機(jī)相對(duì)離子色譜系統(tǒng)的損傷；實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,，在本次實(shí)驗(yàn)中,，儀器基線平穩(wěn)、背景值低,、季銨鹽色譜峰無雜峰干擾,、無明顯拖尾、保留時(shí)間穩(wěn)定,、滿足定量需要,。
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