皖儀科技離子色譜法測定透明質(zhì)酸中的季銨鹽
引言
透明質(zhì)酸(Hyaluronic acid,，HA),，又稱玻尿酸，是一種酸性粘多糖,。透明質(zhì)酸以其獨特的分子結構和理化性質(zhì)在機體內(nèi)顯示出多種重要的生理功能,，如潤滑關節(jié)，調(diào)節(jié)血管壁的通透性,，調(diào)節(jié)蛋白質(zhì),，水電解質(zhì)擴散及運轉(zhuǎn)，促進創(chuàng)傷愈合等,。具有較高臨床價值的生化藥物,，廣泛應用于各類眼科手術，如晶體植入,、角膜移植和抗青光眼手術等,。還可用于治療關節(jié)炎和加速傷口愈合。將其用于化妝品中,，能起到獨特的保護皮膚作用,，可保持皮膚滋潤光滑、細膩柔嫩,、富有彈性,，具有防皺、抗皺,、美容保健和恢復皮膚生理功能的作用,。
透明質(zhì)酸是人體皮膚組成成分之一，并且具有良好的保濕作用,，目前被廣泛用于第四代化妝品中,，被譽為理想的天然保濕因子，國際上添加HA的化妝品種類已從最初的膏霜,、乳液,、化妝水,、精華素膠囊、膜貼擴展到溶液,、粉餅,、口紅、洗發(fā)護發(fā)劑,、摩絲等，應用日趨廣泛,。但天然透明質(zhì)酸存在穩(wěn)定性較差,，易發(fā)生降解和親水性過強等缺點，限制了其應用,，因此通過對透明質(zhì)酸進行修飾改性,，從而實現(xiàn)新的生物活性和功能，最常見的一種改性透明質(zhì)酸就是透明質(zhì)酸的季銨鹽,。季銨鹽作為常規(guī)的陽離子,，可以采用離子色譜進行測試。
1 實驗方法
1.1測試條件
儀器：IC6200系列離子色譜儀配置陽離子抑制器
色譜柱：陽離子分析柱柱溫：30℃,；
流速：1ml/min,；
進樣量：25μL；
檢測器：電導檢測器
1.2 實驗試劑
淋洗液：10mM 甲烷磺酸溶液等度淋洗,；
氯化鈉溶液：稱取7g氯化鈉,，用水溶解并定容至100mL,配制成0.07g/mL的氯化鈉溶液。
氫氧化鈉溶液：稱取氫氧化鈉4g,，用水溶解并定容至100mL,配制成1mol/L的氫氧化鈉溶液,。
標樣：2,3-二羥基丙基-三甲基氯化銨標準物質(zhì)（純度97%）；
鈉離子標準溶液：ρ（K+）=1000mg/L
銨根離子標準溶液：ρ（NH4+）=1000mg/L
樣品：客戶提供
標準儲備溶液：稱取0.0871g季銨鹽（2,3-二羥基丙基-三甲基氯化銨）,，用去離子水溶解并定容至50mL,，濃度為1690mg/L。
1.3 標準曲線的制備
分別精密移取0.1ml,、0.2ml,、0.4 ml、0.6ml,、0.8ml,、1.0ml標準儲備溶液，置于6個10mL容量瓶中,，加超純水定容至標線,，混勻，即得,。標準曲線濃度梯度表見表1,；
表1 標準曲線濃度梯度表
1.4 樣品溶液配制
稱取待測樣品0.2139g于25mL容量瓶中,，加入2mL氫氧化鈉溶液，5mL水,，充分混勻后置于上45℃恒溫水解2h,，水解完成后加入2mL氯化鈉溶液和10mL乙腈，混勻,，放置室溫,，隨后精確定容至刻度，充分混合均勻,，待透明質(zhì)酸沉降后取上清液1mL,，加入1mL氯化鈉溶液、5mL乙腈,，用水定容至10mL,，即得待測樣品溶液。
2 測試結果
2.1 干擾實驗測試
在前處理中可能引入的鈉離子和銨根離子,，需要進行干擾實驗,。按照“1.1“項測試條件進行測試，得到干擾性測試圖譜,，2,3-二羥基丙基-三甲基氯化銨在測試色譜條件下出峰良好,，且與前處理中可能引入的鈉離子和銨根離子保留時間差距明顯，不會形成干擾,。干擾性實驗測試圖譜見圖1,。
圖1 陰離子測試圖譜
2.2 標曲測試
標準曲線系列濃度見表1，按照1.1的測試條件進行測試,，得到標準曲線譜圖多點重疊譜圖如圖2,，待測離子在該色譜條件下標準曲線線性均大于0.9999，線性良好,，線性方程如下表2,。
圖2 標準曲線譜圖多點重疊色譜圖
表2 陰離子線性方程
2.3 樣品測試
按照“1.1"項色譜條件，連續(xù)注入數(shù)針樣品溶液進樣分析,，測得樣品圖譜見圖3,。連續(xù)3針測試數(shù)據(jù)見表3
圖3 樣品連續(xù)3針測試重疊圖譜
表3 樣品連續(xù)3針測試數(shù)據(jù)
3 結論
本次實驗實現(xiàn)了在淋洗液體系中不加入乙腈相條件下的有效色譜分離與定性，避免了有機相對離子色譜系統(tǒng)的損傷,；實驗結果表明,，在本次實驗中，儀器基線平穩(wěn),、背景值低,、季銨鹽色譜峰無雜峰干擾、無明顯拖尾、保留時間穩(wěn)定,、滿足定量需要,。
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