皖儀科技液相色譜
測(cè)定醬油中黃曲霉毒素·柱后碘試劑衍生專機(jī)系統(tǒng)
繼前期文章《應(yīng)用案例 | 皖儀科技液相色譜測(cè)定黃曲霉毒素》（點(diǎn)擊藍(lán)色標(biāo)題閱讀原文）采用了光化學(xué)衍生器檢測(cè)了中藥材中黃曲霉毒素中B族和G族化合物,。本篇文章參考了《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中黃曲霉毒素B族和G族的測(cè)定》GB 5009.22-2016第三法高效液相色譜-柱后碘試劑衍生方法條件，采用皖儀科技高效液相色譜儀LC3200系列配置熒光檢測(cè)器,、柱后衍生系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè),。
1 實(shí)驗(yàn)方法
1.1 儀器配置
皖儀科技高效液相色譜儀LC3200系列
1.2 測(cè)試條件
液相色譜條件流動(dòng)相：A相，水,；B相,，乙腈-甲醇（50+50）；
等梯度洗脫條件：A,，61%,；B：39%,；
色譜柱：C18 5μm, 4.6×250mm；
柱溫：40℃,；
流速：1.0 mL/min；
進(jìn)樣量：50μL,；
柱后衍生系統(tǒng)衍生溶液：0.05%碘溶液,；
衍生溶液流速：0.2mL/min；
衍生反應(yīng)管溫度：70℃,；激光波長(zhǎng)：360nm,；發(fā)射波長(zhǎng)：440nm。
1.3 試劑及實(shí)驗(yàn)材料
甲醇（CH3OH）：色譜純,；
乙腈（CH3CN）：色譜純,；
氯化鈉（NaCl）；
磷酸氫二鈉（Na2HPO4）,；
磷酸二氫鉀（KH2PO4）,；
氯化鉀（KCl）；
鹽酸（HCl）,；
吐溫-20（C58H114O26),；
碘衍生使用試劑：碘（I2）；
混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（AFT B1和AFT G1：1μg/mL,，AFT B2和AFT G2：0.3μg/mL）,；
免疫親和柱；
一次性注射器,；
微孔濾膜（0.22μm,、0.45μm）；
渦旋混合器,；
超聲波清洗機(jī),；
離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥6000 r/min；
氮吹儀,。
1.4 溶液配制
n 1.4.1乙腈-甲醇溶液（50＋50）
取500mL乙腈加入500mL甲醇,。
n 1.4.2磷酸鹽緩沖溶液（PBS）
稱取8.00g氯化鈉、2.92g十二水磷酸氫二鈉,、0.20g磷酸二氫鉀,、0.20g氯化鉀，用900mL水溶解,，用鹽酸調(diào)節(jié)pH至7.4,，用水定容至1000mL。
n 1.4.3 1%吐溫-20的PBS
取10mL 吐溫-20,用PBS定容至1000mL,。
n 1.4.4 0.05%碘溶液
稱取0.1g碘,，用20mL甲醇溶解,，加水定容至200mL，用0.45μm的濾膜過(guò)濾,，現(xiàn)配現(xiàn)用,。
n 1.4.5混合標(biāo)準(zhǔn)工作液（AFT B1和AFT G1：100ng/mL，AFT B2和AFT G2：30ng/mL）
準(zhǔn)確移取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（AFT B1和AFT G1：1μg/mL,，AFT B2和AFT G2：0.3μg/mL）1mL,，用乙腈稀釋并定容至10mL。密封后避光-20℃下保存,，三個(gè)月內(nèi)有效,。
n 1.4.6標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液
分別準(zhǔn)確移取混合標(biāo)準(zhǔn)工作液10μL、50μL,、200μL,、500μL、1000μL,、2000μL,、4000μL至10mL容量瓶中，用初始流動(dòng)相定容至刻度（含AFT B1和AFT G1濃度為0.1ng/mL,、0.5ng/mL,、2.0ng/mL、5.0ng/mL,、10.0ng/mL,、20.0ng/mL、40.0ng/mL,，AFT B2和AFT G2濃度為0.03ng/mL,、0.15ng/mL、0.6ng/mL,、1.5ng/mL,、3.0ng/mL、6.0ng/mL,、12ng/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液,。
2 結(jié)果與討論
2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線
圖1 黃曲霉毒素G2標(biāo)準(zhǔn)曲線及相關(guān)系數(shù)
圖2 黃曲霉毒素G1標(biāo)準(zhǔn)曲線及相關(guān)系數(shù)
圖3 黃曲霉毒素B2標(biāo)準(zhǔn)曲線及相關(guān)系數(shù)
圖4 黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)曲線及相關(guān)系數(shù)
說(shuō)明：黃曲霉素素G2、G1,、B2與B1標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍較好,，線性相關(guān)系數(shù)＞0.9999，滿足實(shí)驗(yàn)分析需求,。
2.2 標(biāo)準(zhǔn)品
圖5 黃曲霉毒素G2 G1 B2 B1標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖
表2黃曲霉毒素G2 G1 B2 B1標(biāo)準(zhǔn)品色譜參數(shù)表
說(shuō)明：由上述混標(biāo)譜圖可見,，標(biāo)準(zhǔn)品分離較好，分離度在2.0以上,，滿足分離要求,。
2.3 重復(fù)性
圖6 黃曲霉毒素G2,G1,B2,B1標(biāo)準(zhǔn)品重復(fù)性實(shí)驗(yàn)色譜圖
表3黃曲霉毒素G2色譜參數(shù)
表4黃曲霉毒素G1色譜參數(shù)
表5黃曲霉毒素B2色譜參數(shù)
表6黃曲霉毒素B1色譜參數(shù)
說(shuō)明：黃曲霉毒素G2保留時(shí)間RSD值為0.116%,，峰面積RSD值為0.620%；黃曲霉毒素G1保留時(shí)間RSD值為0.104%,，峰面積RSD值為0.575%,；黃曲霉毒素B2保留時(shí)間RSD值為0.100%，峰面積RSD值為0.259%,；黃曲霉毒素B1保留時(shí)間RSD值為0.114%,，峰面積RSD值為0.346%，重復(fù)性較好,。
2.4 檢出限
圖7黃曲霉毒素G2,G1,B2,B1標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖
表7黃曲霉毒素G2,G1,B2,B1色譜參數(shù)
表8黃曲霉毒素G2,G1,B2,B1檢測(cè)限
2.5 樣品測(cè)試
n 2.5.1樣品提取
稱取5.0039g醬油于50mL離心管中，加入甲醇定容至25mL,渦旋混勻,，置于超聲波中振蕩20min,，在6000 r/min下離心10 min,取上清液備用。
n 2.5.2樣品凈化
2.5.2.1上樣液的準(zhǔn)備準(zhǔn)確移取4mL上述上清液,，加入46mL 1% 吐溫-20的PBS,，混勻。2.5.2.2免疫親和柱的準(zhǔn)備將低溫下保存的免疫親和柱恢復(fù)至室溫,。
n 2.5.2.3試樣的凈化
免疫親和柱內(nèi)的液體放棄后,，將上述樣液移至50mL注射筒中，調(diào)節(jié)下滴速度,，控制樣液以1mL/min～3mL/min的速度穩(wěn)定下滴,。待樣液滴完后，往注射筒內(nèi)加入2×10mL水,，以穩(wěn)定流速淋洗免疫親和柱,。待水滴完后，在親和柱下部放置10mL刻度試管,，取下50mL的注射器筒,，2×1mL甲醇洗脫親和柱，控制1mL/min～3mL/min的速度下滴,，收集全部洗脫液至試管中,。在50℃下用氮?dú)饩従弻⑾疵撘捍抵两桑贸跏剂鲃?dòng)相定容至1.0mL,，渦旋30s溶解殘留物,，0.22μm濾膜過(guò)濾，收集濾液于進(jìn)樣瓶中進(jìn)樣,。進(jìn)樣量取50μL上樣分析,，檢測(cè)譜圖如下：
圖8醬油樣品色譜圖
說(shuō)明：從檢測(cè)結(jié)果可知，醬油樣品中未檢出黃曲霉毒素G2 G1 B2 B1,，結(jié)果正常,。
3 結(jié)論
本次采用皖儀科技高效液相色譜儀LC3200系列配置熒光檢測(cè)器,、柱后衍生系統(tǒng)，依據(jù)《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中黃曲霉毒素B族和G族的測(cè)定》GB 5009.22-2016第三法高效液相色譜-柱后衍生法,。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,，黃曲霉毒素G2 G1 B2 B1的線性良好，R值均在0.999以上,，各黃曲霉毒素峰型較好,，分離度均在2.0以上，分離效果好,。黃曲霉毒素G2 G1 B2 B1的定性RSD（%）和定量RSD（%）均小于1%,，符合標(biāo)準(zhǔn)。說(shuō)明了該方法配備皖儀科技LC3200系列儀器檢測(cè)黃曲霉毒素的可行性,，完全滿足黃曲霉毒素的檢測(cè)要求,。
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
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