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當(dāng)前位置:深圳市安培生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>質(zhì)粒電泳3條帶,?5條帶,?一文告訴你原因
1.相信很多小伙伴將質(zhì)粒電泳后發(fā)現(xiàn),,質(zhì)粒不是單一條帶,而是出現(xiàn)了很多條帶,,例如下圖:
2.質(zhì)粒為什么出現(xiàn)這樣的情況,?
一般理解來(lái)說(shuō),,質(zhì)粒DNA應(yīng)如圖2(左)所示的簡(jiǎn)單環(huán)狀結(jié)構(gòu)。然而,,雙鏈環(huán)狀DNA的分子軸變形或雙螺旋的扭曲,,導(dǎo)致閉合環(huán)狀DNA中每個(gè)螺旋轉(zhuǎn)彎的實(shí)際堿基對(duì)數(shù)量發(fā)生變化,或者導(dǎo)致螺旋軸發(fā)生規(guī)則的空間變形,,產(chǎn)生拓?fù)浣Y(jié)構(gòu),,形成質(zhì)粒DNA的超螺旋性狀(圖2右)。
因此,不同的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)將使質(zhì)粒DNA形成多種形式,,包括共價(jià)封閉圓形(CCC)形式,、開放圓形(OC)形式(也稱為“缺口形式")和線性形式(通常通過(guò)奇特的限制性消化獲得)。在CCC形式中,,兩條DNA鏈?zhǔn)枪矁r(jià)閉合的,,DNA是超螺旋的。這種亞型的結(jié)構(gòu)最緊密,。如果DNA斷裂產(chǎn)生缺口,,就會(huì)產(chǎn)生OC,卷曲也就消失了,。當(dāng)兩條線在同一位置斷裂時(shí),,就會(huì)產(chǎn)生線性形式,。此外,質(zhì)??赡芤怨丫垠w形式出現(xiàn),,例如串聯(lián)體,而串聯(lián)體又可能以不同的異構(gòu)體形式存在,。所有這些形式都可以通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳觀察到,。但出現(xiàn)多少種條帶會(huì)根據(jù)你的質(zhì)粒提取技術(shù)、質(zhì)粒的新鮮程度,、電泳液的配置以及瓊脂糖凝膠的配置等有所不同,。
2.怎么區(qū)分質(zhì)粒的電泳條帶?
一般來(lái)說(shuō),,質(zhì)粒遷移速度由快到慢分別是共價(jià)封閉原形(超螺旋)形式,、線性和開放圓環(huán)(開環(huán))形式,并伴隨著其他形式,。原因是:電泳DNA遷移速率與分子大小和構(gòu)象相關(guān),,分子構(gòu)象越大,空間位阻阻力越大,。超螺旋結(jié)構(gòu)較為緊密,,因此跑的快;開環(huán)質(zhì)粒由于DNA斷開,,阻力增大,,因此跑的最慢。
3.怎么驗(yàn)證質(zhì)粒是否可用,?
綜上所述,,質(zhì)粒存在多少條帶與多種因素相關(guān),沒有存在絕對(duì)的衡量標(biāo)準(zhǔn),。但如果用限制性內(nèi)切酶消化質(zhì)粒DNA,,只會(huì)出現(xiàn)一條清晰的條帶。并且,,由于酶切形成線性化DNA片段,,其電泳遷移速率會(huì)比對(duì)照組原始質(zhì)粒的超螺旋結(jié)構(gòu)速度慢,可以檢驗(yàn)質(zhì)粒是否被切開,。
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