1.Marker相關(guān)問題

1.1Marker 不直，偏斜或拖尾

原因：

1.膠配制的問題,，制作不均勻或有污染或瓊脂糖質(zhì)量不好,；

2.電泳緩沖液過于老舊，考慮更換,；

3.電壓太高,，凝膠受熱導(dǎo)致不均勻；

4.電泳槽的電極歪斜,；

1.2Maker 跑不開

原因：

1.膠濃度太大,；

2.電泳時(shí)間太短；

2.PCR產(chǎn)物相關(guān)問題

2.1沒條帶

原因：

沒跑出來

2.2條帶微弱

原因：

1.DNA降解

2.上樣量過少

3.沒跑出來,，產(chǎn)物濃度過低,，需再次PCR

2.3非特異性擴(kuò)增

原因：

1.引物設(shè)計(jì)不合理,。需重新設(shè)計(jì)引物,，balst檢測引物特異性,；

2.試劑被污染。包括水,，酶,，引物等。重新更換,；

3.退火溫度太高,。提高退火溫度，增加退火時(shí)間,，減少循環(huán)數(shù),；

4.酶加入過多；

2.4 PCR產(chǎn)物彌散,，拖尾或偏斜,，Maker正常

原因：

1. 引物保存不當(dāng)，降解,。重新配制引物工作液,。

2.模板降解或過量。重新檢查模板質(zhì)量,，減少模板用量,。

3.非特異性擴(kuò)增。提高退火溫度,，增加退火時(shí)間,，減少循環(huán)數(shù)。

4.酶量過多或酶的質(zhì)量差,。

5. 有蛋白和鹽的污染,。

2.5 PCR產(chǎn)物和Maker 都彌散或拖尾

原因：

1.膠配制的問題，制作不均勻或有污染或瓊脂糖質(zhì)量不好,；

2.電泳緩沖液過于老舊,，考慮更換。

3.電壓太高,，凝膠受熱導(dǎo)致不均勻,。

2.6 PCR產(chǎn)物與目的大小不符合

原因：

1.引物特異性不好。需重新設(shè)計(jì)引物,，balst檢測引物特異性,。

2.存在新的異構(gòu)體。

3.是目的基因,，但大小有差異（我遇到過）,。膠回收過后再次電泳條帶變?yōu)檎４笮　Ｓ龅竭@個(gè)情況可以測序看看結(jié)果。

2.7 電泳孔亮

原因：有蛋白或者多糖的污染,，這些大分子物質(zhì)影響了DNA或RNA的出孔,，使其停留在孔中或者出孔很慢。導(dǎo)致孔以及接近孔的位置很亮,。

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