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三個(gè)常見(jiàn)小問(wèn)題:
細(xì)胞培養(yǎng)用的培養(yǎng)基是不是必須加雙抗,?血清在使用之前是不是一定要滅活?往培養(yǎng)基里加細(xì)胞因子又是什么操作,?
要不要加雙抗,?
在培養(yǎng)基中添加抗生素是一種常見(jiàn)的操作,,其主要作用是抑制或殺死培養(yǎng)物中的某些細(xì)菌或真菌,,從而避免它們對(duì)目標(biāo)細(xì)胞的干擾和污染,。
在培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中,選擇適當(dāng)濃度和種類的抗生素,,可以有效地消除或減少雜菌、污染菌或其他不需要的微生物,,保證培養(yǎng)物的純度和穩(wěn)定性,。
同時(shí),添加抗生素還可以用來(lái)篩選或檢測(cè)耐藥性菌株,,評(píng)估其對(duì)抗生素的敏感性和耐受性,。
但是,,添加抗生素并不能確保你的細(xì)胞一定不被微生物污染,因操作不當(dāng)造成污染的還是會(huì)被污染的,。
并且,,一旦細(xì)胞被污染,抗生素也只能起到一定的抑制延緩作用,,并不能全部殺滅微生物,。而且,長(zhǎng)期添加抗生素的話,,還容易掩蓋培養(yǎng)環(huán)境的真實(shí)情況,。
因此 ,雖然在培養(yǎng)基中添加抗生素是常見(jiàn)操作,,但并不是必須操作,。
細(xì)胞因子是什么?
除了抗生素外,,培養(yǎng)基中還可以添加細(xì)胞因子,,以模擬體內(nèi)環(huán)境和調(diào)節(jié)細(xì)胞功能。
細(xì)胞因子是一類多肽分子或蛋白質(zhì),,由細(xì)胞自身或其他細(xì)胞產(chǎn)生,,并通過(guò)受體介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑影響目標(biāo)細(xì)胞的增殖、分化,、存活,、遷移等過(guò)程。
在細(xì)胞培養(yǎng)中,,添加適當(dāng)濃度和種類的細(xì)胞因子,,可以促進(jìn)細(xì)胞增殖和分化,提高細(xì)胞存活率和功能表現(xiàn),。
例如,,添加表皮生長(zhǎng)因子(EGF)可以促進(jìn)表皮細(xì)胞增殖和修復(fù);添加肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)可以促進(jìn)肝細(xì)胞增殖和再生,;添加白細(xì)胞介素-2(IL-2)可以促進(jìn)T淋巴細(xì)胞增殖和活化等,。
此外,添加某些細(xì)胞因子還可以誘導(dǎo)干細(xì)胞分化為特定類型的成體細(xì)胞,,如添加神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(NGF)可以誘導(dǎo)干細(xì)胞分化為神經(jīng)元,。
血清要滅活才能用?
血清中含有生長(zhǎng)因子可促進(jìn)細(xì)胞繁殖,,含有附著因子可促進(jìn)細(xì)胞貼壁,,同時(shí)還有一種特殊的活性能抵抗胰蛋白酶的消化作用。
血清內(nèi)含有豐富的礦物質(zhì),、酯類和激素,。最常見(jiàn)的血清包括:小牛血清,、胎牛血清、成年馬血清等,。其中胎牛血清對(duì)培養(yǎng)要求高的細(xì)胞系,。
血清來(lái)源于動(dòng)物, 因此必定存在批次間的差異,,且生產(chǎn)過(guò)程中由于工藝流程的不同,,哪怕是同一類型的血清也會(huì)存在質(zhì)量上的巨大差異。
血清的滅活是將血清置于56攝氏度中30分鐘,,然后再分裝成數(shù)份保存于-20攝氏度,。
血清加熱的最初目的是為了免疫分析時(shí)用于滅活補(bǔ)體的,因此就有了血清使用前要滅活的說(shuō)法,。
但現(xiàn)在商業(yè)化的血清產(chǎn)品,,基本上出廠之前都經(jīng)過(guò)了滅活處理,所以一般情況下,,就不需要再操作一次滅活了,,除非供應(yīng)商在銷售時(shí)特別強(qiáng)調(diào)了要進(jìn)行這個(gè)操作。
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