簡介：

免疫熒光技術是在免疫學,、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術,。傳統(tǒng)實驗方法用小玻片,，先泡酸,、再晾干、再 coating,、再種細胞,、染色、封片成像,。

本文章使用新方法,，我們將描述在通道載玻片內培養(yǎng)大鼠成纖維細胞（Rat1）的單個實驗案例。然后,，我們用AlexaFluor®488鬼筆環(huán)肽染色F-肌動蛋白細胞骨架，并用DAPI對細胞核進行復染,。

實驗步驟：

培養(yǎng),，固定，染色,，成像

培養(yǎng)：

1.在無菌條件下打開ibidi μ-Slide并將其放在μ-Slide架（80003）上,。將Rat1細胞懸浮液加入通道中。

2.用提供的蓋子輕輕地蓋住儲液器,?？梢圆糠株P閉它們。

3.將架子放入培養(yǎng)箱（37°C; 5％CO2）中，讓細胞附著（60分鐘）,。然后用無細胞培養(yǎng)基填充兩個儲庫,。

4.培養(yǎng)過夜。

固定細胞：

1.通過使用細胞培養(yǎng)抽吸裝置或移液管從儲庫中吸出整個培養(yǎng)基,。用Dulbecco's PBS洗滌細胞,，緩慢地將液體施加到一個空的儲液器中，并從對面的儲液器中吸出,。

2.通過在PBS中使用3.7％多聚甲醛以相同的方法固定細胞,。從通道的另一側移除儲液器的液體并等待10分鐘。

洗滌封閉：

1.用PBS洗滌細胞,。

2.在PBS中使用0.1％Triton®X-100溶液通透3-5分鐘,。

3.在PBS溶液中施加μl的1％BSA 溶液封閉20分鐘。

4.用PBS洗滌細胞

染色鏡檢

1.從通道中清除所有液體,。從通道中吸出液體后,，不要讓通道干燥。

2.用AlexaFluor®488鬼筆環(huán)肽（1Unit+500μl PBS+ 1％BSA,，InvitrogenCorp.）在室溫下培養(yǎng)20分鐘,。

3.用PBS洗滌細胞并清空通道。

4.施用DAPI（0.1μg/ ml,，Sigma-Aldrich）3-5分鐘,。

5.用PBS洗滌細胞并除去所有液體。用滴管瓶注入 Ibidi封片油,。用提供的蓋子蓋住儲液器,。μ-Slide可以存儲大約4周。

6.在熒光顯微鏡下選擇適當?shù)臑V鏡,，也可以使用浸油觀察細胞,。

優(yōu)點：

1.高分辨率成像

  ibidi載玻片非常適合寬場熒光、共焦成像,、FRAP,、FRET、FLIM和相差成像,。

2.操作快速,、簡單

  一體式腔室簡化了您的免疫熒光實驗流程。

3.經(jīng)濟高效的實驗

  僅需少量細胞和少量試劑,。

  深圳安培生物科技有限公司,，是一家具有核心的技術實力、壹流的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè),?？偛吭O在廣東,，服務面向全國。安培生物集進口試劑,、實驗室耗材銷售,、技術服務與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學的發(fā)展提供壹流的產(chǎn)品與服務,。本公司建立了涵蓋分子生物學,、細胞生物學、免疫學,、信號傳導和神經(jīng)科學等領域的產(chǎn)品供應線,，在各個領域內向用戶提供世界前沿水平和質量穩(wěn)定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機構,、高等院校等優(yōu)質客戶提供優(yōu)質的產(chǎn)品,、技術支持與服務。