簡介：
細(xì)胞遷移(Cell migration)：因其類似體外傷口愈合過程，又名傷口愈合實驗(Wound healing assay),，是指細(xì)胞在接收到遷移信號或感受到某些物質(zhì)的梯度后而產(chǎn)生的移動,?？捎糜诳梢杂^察藥物、基因等外源因素對細(xì)胞遷移,、修復(fù)和相互作用的影響,。
 

原理：
在融合的單層細(xì)胞上人為制造一個空白區(qū)域,，稱為“劃痕/傷口"，劃痕邊緣的細(xì)胞會逐漸進(jìn)入空白區(qū)域使“劃痕/傷口"愈合,，于細(xì)胞遷移過程中在開始和定期捕獲圖像,，通過測量不同時間點(diǎn)的劃痕間距并計算差值，可對細(xì)胞的遷移能力做出判斷,。

材料及儀器：
耗材：六孔板,、馬克筆、直尺,、200ul槍頭,、PBS、（血清）細(xì)胞培養(yǎng)基等,。

實驗步驟：

1.劃線：于六孔板底面,，馬克筆順直尺畫三條橫線作為標(biāo)記線。

2.種板：根據(jù)分組種板,，細(xì)胞密度為5x105個/孔左右,。并務(wù)必鋪勻。

3.劃痕：待細(xì)胞長滿后,，用直尺比著，200ul槍頭垂直于孔板和畫的標(biāo)記線劃兩條垂線,，使劃痕與標(biāo)記線相交,，可以形成若干交叉點(diǎn)，作為固定的檢測點(diǎn),。

4.清洗：棄去舊培養(yǎng)基,，用PBS輕輕潤洗兩到三次，直到劃下來的細(xì)胞沖洗干凈,。

5.加液：根據(jù)分組分別加入加藥培養(yǎng)基或無血清培養(yǎng)基,。

6.拍照觀察：劃痕、清洗,、加液完成后,，用顯微鏡拍不同倍數(shù)的照片，作為0h對照,。放入37℃,，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。在所需時間點(diǎn)取出細(xì)胞,，于顯微鏡下觀察同一位置劃痕寬度并拍照,。

7.數(shù)據(jù)分析：一種是統(tǒng)計細(xì)胞遷移的距離，一種是統(tǒng)計劃痕面積,。都可以用ImageJ軟件來進(jìn)行分析,。

注意事項或經(jīng)驗分享：

1.直尺和馬克筆等工具用前務(wù)必照紫外消殺,。
2.種板所用細(xì)胞數(shù)目可根據(jù)細(xì)胞的生長快慢調(diào)整接種數(shù)量。保證每組細(xì)胞鋪板密度一致,，保證每孔務(wù)必鋪勻,。
3.提前用馬克筆畫好線，避免細(xì)胞種板后不好操作,。槍頭畫線之前,，不要棄去原培養(yǎng)基，否則劃下來的細(xì)胞團(tuán)塊會堆積在劃痕邊緣上堆積導(dǎo)致寬度不統(tǒng)一,。
4.用槍頭畫線時,，要用力均勻一致，垂直穩(wěn)定一氣呵成,，避免寬度差別較大不利于結(jié)果分析的準(zhǔn)確性,。
5.根據(jù)交叉點(diǎn)定位拍照，避免了前后觀察時位置不固定的問題,，結(jié)果更有說服力,。
6.務(wù)必清洗干凈劃下來的活細(xì)胞，避免在拍照期間細(xì)胞貼壁在劃痕處并進(jìn)行增殖影響結(jié)果,。
7.0h拍照時可以在試驗記錄本上標(biāo)記拍照位置,，以便下各時間段拍攝同一位置。
8.拍照時注意不要露出馬克筆畫的線條,，不要鏡頭過于模糊,，盡量不要選擇邊緣的光影差別過大的位置，切換鏡頭時不要忘記換標(biāo)尺,，否則都會影響結(jié)果的自動分析,。
9.根據(jù)細(xì)胞種類，選擇無血清或低血清培養(yǎng)基來降低細(xì)胞增殖的影響,，或用Mitomycin（1μg/ml）處理1h,，抑制細(xì)胞的分裂，消除增殖的影響,。但同時也會影響細(xì)胞遷移的速度,。
10.一般拍照時間為0，2,，4,，6，8,，10,，12，16，24小時等選取,，不建議超過24h,，過度增殖造成實驗假陽性結(jié)果。
11.手工劃痕可能難以保證寬度一致性,，culture Insert是現(xiàn)在市面上也推出的一種可以提前占據(jù)劃痕區(qū)域的模具,，將細(xì)胞接種于Dish中間的Insert培養(yǎng)，細(xì)胞長滿Insert區(qū)域后用鑷子移除Insert產(chǎn)生筆直且無細(xì)胞損傷的劃痕,。
12.分析結(jié)果中長度法,，由于細(xì)胞遷移并不是齊頭并進(jìn)的，可能組間差異大,，建議用平均多條距離的值來代表,。

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