簡(jiǎn)介：
CHO細(xì)胞（Chinese hamster ovary cell，CHO）一個(gè)轉(zhuǎn)化細(xì)胞系,，1957年從中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞得到,。CHO細(xì)胞目前是現(xiàn)代制藥企業(yè)進(jìn)行研發(fā)、生產(chǎn)生物治療藥物 (單抗,、酶,、激酶和激素等) 中常用的非人類哺乳動(dòng)物細(xì)胞系。

原理：
培養(yǎng)基無(wú)特殊要求,，可有多種選擇,一般用DMEM（高糖）培養(yǎng)基+10%胎牛血清+2%雙抗,。置于37℃,5%CO2的培養(yǎng)箱培養(yǎng)。每隔48h換液,，或當(dāng)培養(yǎng)基呈現(xiàn)熒光黃色及時(shí)換液,，否則細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)大規(guī)模脫落和變形死亡。

當(dāng)單層培養(yǎng)細(xì)胞匯合達(dá)90%以后(兩天左右),，棄去培養(yǎng)基,，用2ml不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗2次,，用0.5mlPBS+0.5ml 含0.25%ETDA的胰蛋白酶消化1-2min（在培養(yǎng)箱放30s-1min）,，鏡下觀察變圓或輕輕擊打培養(yǎng)皿側(cè)壁發(fā)現(xiàn)有細(xì)胞團(tuán)塊脫落或皿底花斑狀，用1ml（血清）細(xì)胞培養(yǎng)基終止消化,，九宮格法吹落細(xì)胞收集到離心管,，以800-1000rpm，室溫離心5min,。

以1:2~1:3的比例傳代,，離心棄去廢液，用2ml~3ml（血清）細(xì)胞培養(yǎng)基充分重懸細(xì)胞沉淀成單個(gè)細(xì)胞,，以“Z"字打入含有7ml培養(yǎng)基的10cm皿中,，輕柔十字晃勻不超過(guò)十下并靜置數(shù)分鐘后鏡下觀察,，平穩(wěn)放入培養(yǎng)箱中。

凍存液的配置為血清：二甲基亞砜(DMSO)=9:1,。取長(zhǎng)勢(shì)良好,，匯合度達(dá)90%并無(wú)污染的細(xì)胞，消化離心后用凍存液1.5ml重懸后轉(zhuǎn)移至凍存管中,，標(biāo)記好細(xì)胞種類,、日期、姓名,，放入恢復(fù)室溫的梯度凍存盒,，一同放置于-80°C冰箱。

準(zhǔn)備好離心管中放入3ml（血清）細(xì)胞培養(yǎng)基,，并確保水浴鍋打開(kāi)并達(dá)到37℃，從-80℃冰箱取出目標(biāo)凍存管,，放入密封袋并在水浴鍋中迅速搖晃解凍<1min,，與3mL培養(yǎng)基混合均勻。在800 rpm,，離心5分鐘,，棄去上清液，用新培養(yǎng)基重懸細(xì)胞為單個(gè)細(xì)胞狀態(tài),，加入10cm皿中,，培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。

注意事項(xiàng)：

1.CHO細(xì)胞對(duì)損傷不易耐受,，請(qǐng)注意密切觀察。

2.不同胰酶消化速度有差別,，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)調(diào)整用量和用時(shí),。

3.細(xì)胞傳代用PBS洗的目的是去除舊培養(yǎng)基中血清對(duì)胰酶的抑制作用。

4.不要將細(xì)胞中液體吸凈后放置過(guò)久,，細(xì)胞變干后死亡,。

5.細(xì)胞消化所用胰酶的最適工作溫度大約在37攝氏度左右，故放入培養(yǎng)箱更好的促進(jìn)胰酶消化,。

6.細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,，才能最大限度的保存細(xì)胞活力。（細(xì)胞保護(hù)劑（DMSO）能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性,，緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇時(shí)快速融化,，避免由于緩慢融化使細(xì)胞外結(jié)晶的水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷）,。

7.細(xì)胞凍存嚴(yán)格遵循梯度降溫,，不可直接放入低溫冰箱，如果沒(méi)有梯度凍存盒,，可以4℃ 10-30min,，-20℃ 30-1h，-80℃過(guò)夜,。

8.復(fù)蘇后第二天換液是為了去除殘留凍存液對(duì)細(xì)胞的傷害,。

9.細(xì)胞量少或凍存過(guò)久的細(xì)胞復(fù)蘇到中皿中，等長(zhǎng)滿后傳代到大皿中,。

安培生物致力成為推動(dòng)生命科學(xué)進(jìn)步值得信賴的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實(shí)力,、先進(jìn)的經(jīng)營(yíng)管理水平和完善的市場(chǎng)銷售體系的生物高科技企業(yè)?？偛吭O(shè)在廣東,，服務(wù)面向全國(guó)。安培生物集進(jìn)口試劑,、實(shí)驗(yàn)室耗材銷售,、技術(shù)服務(wù)與合約開(kāi)發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務(wù),。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué),、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué),、信號(hào)傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線,，在各個(gè)領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機(jī)構(gòu),、高等院校等客戶提供各種產(chǎn)品,、技術(shù)支持與服務(wù)。

可以在第一時(shí)間為用戶提供比較先進(jìn)的專業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務(wù),。 專業(yè)的技術(shù)力量使得我們能夠?yàn)閺V大用戶提供強(qiáng)大的技術(shù)支持,，深厚的人脈資源使得我們?cè)谌珖?guó)主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進(jìn)的高科技產(chǎn)品推薦給國(guó)內(nèi)從事生物學(xué)領(lǐng)域科研的老師和同仁,。作為專業(yè)性的產(chǎn)品供應(yīng)商,，公司出資存?zhèn)淞舜罅楷F(xiàn)貨，配合優(yōu)秀的銷售隊(duì)伍以及專業(yè)的技術(shù)支持,，隨時(shí)為客戶提供服務(wù),。