二,、線性化載體

三,、純化PCR、酶切產物并連接

將反應結束的產物進行純化,，純化所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,，只要能夠得到可靠的結果,，純化的方法越簡單越好，目前有多種試劑盒可供選擇,；

連接線性化載體和PCR產物,，可根據DNA連接酶試劑盒說明書設置,，對于較大的片段可以選擇4℃連接過夜。

四,、細菌轉化

冰上解凍克隆感受態(tài)細胞（DH5α）,；取重組產物，加至感受態(tài)細胞中,，冰上靜置30min,，42℃水浴熱激45s，迅速置于冰上2-3min,；加入600μL LB液體培養(yǎng)基,37℃搖菌1h,。

PCR正常反應結束后用瓊脂糖凝膠電泳進行檢測,，選擇正確條帶的菌液加入對應的培養(yǎng)基,，37℃搖起來。

注意事項：

②菌落PCR反應程序變性94℃4-5min即可保證外源DNA釋放出來。

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深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術實力,、先進的經營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè),。總部設在廣東,，服務面向全國,。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售,、技術服務與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司,，旨在為生命科學的發(fā)展提供較好的產品與服務。本公司建立了涵蓋分子生物學,、細胞生物學,、免疫學、信號傳導和神經科學等領域的產品供應線,，在各個領域內向用戶提供較高的水平和質量穩(wěn)定的產品,，安培生物致力于為廣大的科研機構、高等院校等客戶提供各種產品,、技術支持與服務,。

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