二,、線性化載體

三,、純化PCR、酶切產(chǎn)物并連接

將反應(yīng)結(jié)束的產(chǎn)物進(jìn)行純化,，純化所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響,。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果,，純化的方法越簡(jiǎn)單越好,，目前有多種試劑盒可供選擇；

連接線性化載體和PCR產(chǎn)物,，可根據(jù)DNA連接酶試劑盒說(shuō)明書(shū)設(shè)置,，對(duì)于較大的片段可以選擇4℃連接過(guò)夜。

四,、細(xì)菌轉(zhuǎn)化

冰上解凍克隆感受態(tài)細(xì)胞（DH5α）,；取重組產(chǎn)物，加至感受態(tài)細(xì)胞中,，冰上靜置30min,，42℃水浴熱激45s，迅速置于冰上2-3min,；加入600μL LB液體培養(yǎng)基,37℃搖菌1h,。

PCR正常反應(yīng)結(jié)束后用瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測(cè)，選擇正確條帶的菌液加入對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)基,，37℃搖起來(lái),。

注意事項(xiàng)：

②菌落PCR反應(yīng)程序變性94℃4-5min即可保證外源DNA釋放出來(lái)。

安培生物致力成為推動(dòng)生命科學(xué)進(jìn)步值得信賴(lài)的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實(shí)力,、先進(jìn)的經(jīng)營(yíng)管理水平和完善的市場(chǎng)銷(xiāo)售體系的生物高科技企業(yè),。總部設(shè)在廣東,，服務(wù)面向全國(guó),。安培生物集進(jìn)口試劑、實(shí)驗(yàn)室耗材銷(xiāo)售,、技術(shù)服務(wù)與合約開(kāi)發(fā)為一體的專(zhuān)業(yè)化高科技公司,，旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué),、細(xì)胞生物學(xué),、免疫學(xué),、信號(hào)傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線，在各個(gè)領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品,，安培生物致力于為廣大的科研機(jī)構(gòu),、高等院校等客戶提供各種產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù),。

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