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夏天到了,,您做好預防細胞污染了嗎,?

時間:2022/6/17閱讀:1987
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注意事項:

夏天到了,天氣炎熱,,空氣中的溫度濕度都在上升,,這時最易滋生細菌等微生物,導致細胞培養(yǎng)過程會沒有那么的順利,,總是被污染,,而且微生物繁殖的速度非常快,。今天我們就來說道說道細胞污染應該怎么預防、處理,。


目前細胞污染大致可分為:細菌,、真菌、支原體,、黑膠蟲,、病毒等污染。那么想要解決問題,,我們就需要知道細胞是遭受了何種污染,,才可對癥下藥。接下來我們將帶領大家逐步分析這些污染,。



細 菌


細菌污染時,,培養(yǎng)基在短時間內變成黃色或白色渾濁,有時稍加震蕩,,便會有很多混濁物漂起,。有些狀況下培養(yǎng)基顏色改變不明顯但細胞形態(tài)會變異(出現多角,多核狀況),、細胞不附著,。


細菌屬于原核生物,,比細胞小很多,在顯微鏡下或成黑色細沙狀,,或背景有大量黑點,。可能造成細胞增殖緩慢或形態(tài)上的改變(多角,、多核等),,細胞質中產生空泡、細胞不附著,。


如遇細菌污染,,我們可以如何處理呢?

合理使用相應抗生素可殺滅細菌:

抗生素作用對象使用比例儲存條件
卡那霉素溶液細菌(如G+,、G-),、支原體稀釋:1:100-20oC
硫酸慶大霉素溶液細菌(如G+、G-),、支原體稀釋: 1:1000AMB室溫(15-30℃)
青鏈雙抗細菌(如G+,、G-)稀釋: 1:100-20oC
青鏈雙抗,10濃縮液細菌(如G+,、G-)稀釋: 1:1000-20oC
青鏈霉素,,制霉菌素三抗細菌(如G+、G-),、真菌(如:酵母菌,、霉菌)稀釋: 1:100-20oC
青鏈霉素,兩性霉素素B三抗細菌(如G+,、G-),、真菌(如:酵母菌、霉菌)稀釋: 1:100-20oC
青鏈霉素,,新霉素三抗細菌(如G+,、G-)稀釋: 1:100-20oC



真 菌


真菌指的是類似棉絮狀的漂浮物,真菌是真核生物,,比細胞大,。在顯微鏡下可觀察到菌絲體,真菌有菌絲體,,呈絲狀,、管狀、樹狀,、串珠狀,。真菌一般呈菌落聚集生長。污染早期不會使培養(yǎng)基變黃,。


細胞被真菌污染后,,仍可生長,,長時間細胞的活力狀態(tài)會變差,梅雨季時的污染率會提高,。


真菌的種類也比較多:酵母菌,、念珠菌、霉菌(青霉菌,、根霉菌,、曲霉)、蕈菌等,。這些菌類都有各自的特點,,很容易區(qū)分。



酵母菌:成串的卵狀物,,體積為細胞的1/5~1/10倍,,可由出芽生殖時的一大一小連體結構識別,污染嚴重時會造成培養(yǎng)基pH值改變,,不易去除,。


念珠菌:卵圓狀,在細胞周邊生長,。

霉菌:霉菌在我們的生活中無處不在,,它比較青睞于溫暖潮濕的環(huán)境,一有合適的環(huán)境就會大量的繁殖,,有綠色,,毛茸茸的青霉菌,還有像樹根一樣根霉菌,。


如果發(fā)現真菌污染,,我們如何進行處理呢?

合理使用相對應的抗生素,,可有效殺滅真菌污染:





抗生素作用對象使用比例儲存條件
兩性霉素素B真菌(如:酵母菌、霉菌)稀釋:1:1000 ~ 1: 10,000-20oC
制霉菌素真菌(如:酵母菌,、霉菌)稀釋:1:100 ~ 1:1000-20oC
青鏈霉素,,制霉菌素三抗細菌(如G+、G-),、真菌(如:酵母菌,、霉菌)稀釋: 1:100-20oC
青鏈霉素,兩性霉素素B三抗細菌(如G+,、G-),、真菌(如:酵母菌、霉菌)稀釋: 1:100-20oC



支 原 體


支原體常來源于實驗人員(支原體常見于人體皮膚,、呼吸道,、生殖道和消化道),、動物源血清及胰酶、消毒不*的器具,,體積只有0.15~0.3μm,,所以能通過一般培養(yǎng)基0.2μm過濾膜進入培養(yǎng)基體系,培養(yǎng)基不會變黃,,所以污染時不容易用常規(guī)方法發(fā)現,,光學顯微鏡難以辨識。






支原體革蘭染色為陰性,,大部分支原體繁殖速度比細菌慢,,對青霉素類的抗生素不敏感。污染不但會緩慢的改變細胞形態(tài)(拉絲,、鋪展),、增殖、基因表達,、蛋白合成及代謝反應,,它攜帶的DNA/RNA與蛋白更可能造成QPCR或Western Blot結果偏差。


方案一:BIOMYC-1(03-036)和BIOMYC-2(03-037)的使用方法:


  1. 加1ml的 BIOMYC-1 溶液至100ml培養(yǎng)基中,,保持受污染的細胞在混合液中培養(yǎng)4天,,期間可用含 BIOMYC-1 的新培養(yǎng)基對細胞進行傳代;

  2. 4天后,,加1ml BIOMYC-2 溶液至100ml的新培養(yǎng)基中,,并維持培養(yǎng)3天,期間可進行傳代,。

  3. 以上是一個處理周期,,必要時可繼續(xù) 2-3 次處理周期。

  4. 每過一個周期,,細胞需要做支原體污染檢測,,以確認效果,從而適當減少實驗過程,。


方案二:BIOMYC-3(03-038)的使用方法:

  1. 加1ml BIOMYC-3至100ml培養(yǎng)基中,;

  2. 持續(xù)培養(yǎng)14天,期間可進行傳代;

  3. 以上是一個處理周期,,必要時可繼續(xù) 2-3 次處理周期,。

  4. 每過一個周期,細胞需要做支原體污染檢測,,以確認效果,,從而適當減少實驗過程。



提 示


支原體殺除試劑對實驗幾乎沒有影響,,可進行細胞實驗,;如果客戶使用其中一種方案,,不能清除支原體,說明該支原體可能在另一種方案的抑菌譜內,;最佳方案是先用方案一處理一周期,,再用方案二處理一周期,然后做支原體檢測,。



黑 膠 蟲


目前科學界對黑膠蟲并無定論,,認為是不明沉淀現象或多種未知生物污染現象的通稱。


黑膠蟲不是一個新的物種,,是大家對顯微鏡下會活躍游動或原代打轉,、顫動的未經測序鑒定的微生物的別稱。因為多呈黑點的游動,,被大家稱為“黑膠蟲",。實際上,它不是蟲子,,經過我們對多個客戶提供的黑膠蟲樣本測序,,發(fā)現實際上它是各種細菌。大多數細菌都有鞭毛,,這也就不難理解,,它為啥會像蟲子一樣游動或原地打轉,顫動,。



在高倍率顯微鏡頭下,,可觀察到各式形狀的小黑點(卵圓狀、球狀,、桿狀等),、活躍的布朗運動及明顯游動現象。

復蘇或傳代時往往會出現黑膠蟲污染,,并且與細胞呈現此消彼長的現象,,部分黑膠蟲具有細胞毒性,可引起細胞生長遲緩或裂解凋亡,,培養(yǎng)基不渾濁,。



方案一:BIOMYC-1(03-036)和BIOMYC-2(03-037)和三抗(03-033)的使用方法:


  1. 加1ml的 BIOMYC-1 和三抗溶液至 100ml培養(yǎng)基中,保持受污染的細胞在混合液中培養(yǎng) 4 天,。期間需加入含 BIOMYC-1和三抗溶液的少許的新培養(yǎng)基;

  2. 4天后,,加1ml BIOMYC-2和三抗溶液至 100ml 的新培養(yǎng)基中,,并維持培養(yǎng) 3 天;

  3. 以上是一個處理周期,,必要時可繼續(xù) 2-3 次如上處理循環(huán),。 


方案二:BIOMYC-3(03-038)和三抗(03-033)的使用方法:

  1. 加1ml BIOMYC-3和三抗溶液至100ml培養(yǎng)基中,;

  2. 持續(xù)培養(yǎng)14天,期間每2-3天更換一次培養(yǎng)基;

  3. 以上是一個處理周期,,必要時可繼續(xù) 2-3 次如上處理循環(huán),。

  4. 在處理過程中,細胞需要做支原體污染檢測,,以確認效果,,從而適當減少實驗過程。 



以上污染與實驗室環(huán)境,,溫度濕度等都有較大的關系,,因此細胞房我們也需要提前做好預防。




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安培生物堅持為生命科學研究,、活體動物轉染,、大規(guī)模生物生產、基因和細胞治療領域客戶,,提供*細胞體內可代謝的核酸轉染試劑,;inviCELL™Platelet lysate無動物血清產品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產,包括培養(yǎng)間充質干細胞和多種免疫細胞系等,,為制藥公司或者生物技術公司提供無血清細胞培養(yǎng)規(guī)模生產服務,;提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養(yǎng)可分解3D基質膠產品,;提供內毒素≦ 1.0 EU/mL,、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產品,。安培生物專注為生物醫(yī)藥領域提供優(yōu)質的產品和技術服務,,努力發(fā)展為基因治療、細胞治療的生物科技企業(yè)


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