用BD公司的Matrigel 1:8或者根據(jù)細胞產(chǎn)生mmp的量來決定稀釋,包被Transwell小室底部膜的上室面,置37℃30min使Matrigel聚合成凝膠。使用前進行基底膜水化,。

制備細胞懸液前可先用基礎培養(yǎng)基加1%的血清培養(yǎng)細胞,，讓細胞饑餓12-24h,進一步去除血清的影響。

消化細胞,終止消化后離心棄去培養(yǎng)液,(用PBS洗1-2遍),用含0.1%的BSA的無血清培養(yǎng)基重懸及調(diào)整密度,，通常調(diào)整細胞密度至5×10^5cells/ml,。

取細胞懸液100μl加入Transwell上室,　也可以根據(jù)細胞生長速度進行調(diào)整，操作小提示：接種劑量不同的細胞,，其侵襲能力是不同的,，細胞量過多，穿過膜的細胞會過多過快,，最后會難以統(tǒng)計結果;而細胞量過少,，可能還沒到檢測的時間點，所有的細胞都已穿過,，進入下室,。因此最少也要保證在收樣的時候，上室內(nèi)還要有一定量的細胞存在,。

24孔板下室一般加入600μl含生長因子或血清的*培養(yǎng)基,特別注意的是,下層培養(yǎng)液和小室間常會有氣泡產(chǎn)生,一旦產(chǎn)生氣泡,下層培養(yǎng)液的趨化作用就會減弱甚至消失,種板時一旦出現(xiàn)氣泡,要將小室提起去除完氣泡,再將小室放進培養(yǎng)板,。若是平行孔，一般設置兩組.

培養(yǎng)細胞:常規(guī)培養(yǎng)12-48h(主要依細胞侵襲能力而定),。24h較常見,時間節(jié)點的設置除了要考慮到細胞的侵襲力外,處理因素以及細胞數(shù)目的影響也不可忽視,。

采用直接計數(shù)法,取出Transwell小室,棄去孔中培養(yǎng)液,用無鈣的PBS洗2遍,甲醇固定30分鐘,將小室適當風干。

 0.1%結晶紫染色20 min,用棉簽輕輕擦掉上層未遷移細胞,注意不要蹭到已穿膜的那一層細胞,，之后再用PBS洗3遍,。

400倍顯微鏡下每個樣本取6-10個視野觀察細胞計數(shù)，取平均值,，統(tǒng)計分析,。