THP-1細(xì)胞培養(yǎng)秘籍給有需要的您

時間：2021/12/2閱讀：3534

THP-1細(xì)胞系是1980年Tsuchiya等人建立的人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系,。它來自一位急性單核細(xì)胞白血病患者的血液，有分化為多種巨噬細(xì)胞的能力,，是各領(lǐng)域研究常用的細(xì)胞系之一,。

THP-1細(xì)胞基本信息

細(xì)胞名稱	THP-1 (人單核細(xì)胞白血病)
細(xì)胞別稱	THP1; THP 1; THPI; THP-1; Tohoku Hospital Pediatrics-1
種屬	人
組織來源	急性單核細(xì)胞白血病,，單核細(xì)胞
生長特性	懸浮細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài)	單核細(xì)胞
生長培養(yǎng)基	RPMI-1640＋10% FBS＋0.05mM β-mercaptoethanol＋1% P/S
培養(yǎng)環(huán)境	氣相：95%空氣,；5%CO₂ 溫度：37℃
推薦傳代比例	1：2-1：4
凍存液配方	90%FBS+10%DMSO

THP-1細(xì)胞的特點

▲

喜歡酸性環(huán)境

在偏酸性環(huán)境中，THP-1生長更快,，所以當(dāng)培養(yǎng)基稍微變黃（呈橘紅色）時,，是適合細(xì)胞生長的，此時補液或半換液即可,。（詳細(xì)操作見下文換液篇）

▲

有密度依賴性

THP-1細(xì)胞密度低時,，生長較慢，培養(yǎng)密度維持在50萬-100萬細(xì)胞/毫升為宜,；超過200萬/毫升則需要傳代,。

▲

對血清要求高

選擇品質(zhì)好的血清更有利于THP-1細(xì)胞生長。

▲ THP-1生長圖片

培養(yǎng)攻略之收貨篇

常溫細(xì)胞

收到細(xì)胞后,，放進(jìn)培養(yǎng)箱靜置2-4小時,，之后將瓶中培養(yǎng)基全部離心（1200rpm或250g，3分鐘）,，去上清,，用適量新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，按比例接種到新培養(yǎng)瓶中,。

凍存細(xì)胞

收到細(xì)胞后,，如果不復(fù)蘇，放進(jìn)-80℃冰箱暫存或放進(jìn)液氮長期保存,。如果復(fù)蘇,，按照常規(guī)復(fù)蘇步驟操作（見下文復(fù)蘇篇）即可。

小貼士：由于THP-1有密度依賴,，將培養(yǎng)瓶豎著放進(jìn)培養(yǎng)箱（瓶蓋朝上）,，可以增加細(xì)胞局部密度，從而促進(jìn)細(xì)胞生長,，注意瓶蓋要保持透氣,。

▲ 常溫THP-1細(xì)胞，收貨處理示意圖

培養(yǎng)攻略之換液篇

補液法

培養(yǎng)基變黃時可補加適量（1~2mL）新鮮培養(yǎng)基,，補加1-2次之后,，用離心的方式全部換液,，離心1200rpm （約250g）3分鐘。

半換液法

以T25瓶子為例,，瓶子里裝有5mL培養(yǎng)基,。豎起瓶子靜置一段時間，待細(xì)胞沉底,，小心吸出2.5mL的培養(yǎng)基,，轉(zhuǎn)移到離心管，離心1200rpm （約250g）3分鐘,，檢查有沒有沉淀,，以免損失細(xì)胞；原瓶補充2.5mL新鮮培養(yǎng)基,，離心管里若有細(xì)胞,，則用新鮮培養(yǎng)基重懸后放回原瓶。

小貼士：如果換液后第二天培養(yǎng)基就變得很黃,，同時鏡下檢查未污染,，說明細(xì)胞密度大，該傳代了,。

▲ 半換液操作示意圖

培養(yǎng)攻略之傳代篇

直接分瓶法

搖晃培養(yǎng)瓶,，把細(xì)胞搖勻，均分到兩個瓶子里,，每瓶再補充等量培養(yǎng)基,。

離心法

離心后計數(shù)，按照40-50萬細(xì)胞/mL的密度接種到T25瓶里,，瓶中培養(yǎng)基量以5mL為宜,。不方便計數(shù)時，按1:2比例傳代,。

小貼士：細(xì)胞碎片較多的情況下,，建議用離心法傳代，離心轉(zhuǎn)速可適當(dāng)降低（推薦800~1000rpm或160~200g）,。

▲ 傳代時機

培養(yǎng)攻略之凍存篇

凍存步驟

1. 預(yù)先配制好凍存液

2. 細(xì)胞1200rpm（約250g）3分鐘離心后

3. 去上清,，用配好的凍存液重懸細(xì)胞

4. 轉(zhuǎn)移入凍存管

5. 凍存管放進(jìn)程序凍存盒

6. 凍存盒放進(jìn)-80度冰箱過夜，再放液氮長期保存

小貼士：

1. 由于THP-1是懸浮細(xì)胞,，更易受到凍存影響,，建議加大凍存密度，大約200萬-300萬/mL為宜,，以提高復(fù)蘇存活率,。

2. 沒有程序降溫盒的同學(xué)，可以選擇非程序凍存液（使用前咨詢試劑商是否適用于THP-1，并做凍存測試）,，或者按照【4℃ 20min→-20℃ 30min→-80℃ 過夜→液氮保存】的順序手動梯度降溫,。

培養(yǎng)攻略之復(fù)蘇篇

復(fù)蘇步驟

1. 預(yù)熱水浴鍋至37℃

2. 準(zhǔn)備一個15mL離心管，加入2-3mL左右*培養(yǎng)基待用

3. 將細(xì)胞從-80℃冰箱或液氮中取出后,，放進(jìn)一次性PE手套中,，立即投入水浴鍋，迅速用力搖晃管子,，使其1分鐘內(nèi)融化

4. 酒精擦拭凍存管,，進(jìn)入生物安全柜，把融化的細(xì)胞懸液緩慢滴加到步驟2準(zhǔn)備好的離心管中

5. 1200rpm（約250g）離心3分鐘

6. 同時準(zhǔn)備1個新的T25培養(yǎng)瓶,，加入5mL*培養(yǎng)基

7. 去上清,，新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后滴加到步驟6培養(yǎng)瓶里，放入培養(yǎng)箱

小貼士：THP-1細(xì)胞復(fù)蘇后通常需要3-5天恢復(fù)狀態(tài),，建議復(fù)蘇后48小時內(nèi)不要進(jìn)行操作,。

常見問題及解決方案

N.1

收貨時細(xì)胞出現(xiàn)偽足，或是碎片較多怎么辦,？

受到運輸影響，懸浮細(xì)胞會短暫性出現(xiàn)形態(tài)改變的現(xiàn)象,，如偽足等,。通過傳代培養(yǎng)，1周左右可以恢復(fù)正常,。一些細(xì)胞在運輸途中死亡而產(chǎn)生碎片,，通過傳代離心可以去除（見上文傳代篇）。

NO.2

培養(yǎng)過程中細(xì)胞發(fā)生貼壁怎么辦,？

少量細(xì)胞貼壁屬于正常情況,，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至新瓶中即可。當(dāng)貼壁細(xì)胞的比例高于20%,，說明細(xì)胞生長環(huán)境有異常,，需排查培養(yǎng)箱設(shè)置、培養(yǎng)基成分,，以及培養(yǎng)器皿是否異常,。

NO.3

培養(yǎng)過程中細(xì)胞發(fā)生聚團怎么辦？

少量細(xì)胞聚團,，呈葡萄串狀,，屬于正常現(xiàn)象,，特別是細(xì)胞密度較低時,，易出現(xiàn)這種情況。更換血清品牌或增大血清比例（不超過20%）有助于解決聚團問題。不建議將聚團的細(xì)胞吹散,，等待密度高時,，會自己分散開。

NO.4

培養(yǎng)基里一定要加β-巰基乙醇嗎,？

β-巰基乙醇是一種常用的培養(yǎng)補充劑,，有抗氧化的作用，可減少氧化應(yīng)激對THP-1細(xì)胞的影響,。當(dāng)細(xì)胞密度過大但需要維持時,，可適當(dāng)增加巰基乙醇的比例（不超過標(biāo)準(zhǔn)量的1.5倍）。

NO.5

鏡下觀察時,，難以聚焦或估算密度怎么辦,？

懸浮細(xì)胞會隨著液體流動，不容易聚焦,，靜置5-10分鐘使細(xì)胞沉底,，之后再輕輕放上顯微鏡觀察，將有助于聚焦和估算細(xì)胞密度,。

▲ 嚴(yán)重聚團的THP-1細(xì)胞

以上就是本期的內(nèi)容,，更多資訊，歡迎點擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊,。

安培生物科技有限公司介紹：

安培生物堅持為生命科學(xué)研究,、活體動物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn),、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶,，提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴增和生產(chǎn),，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等,，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化,、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品,；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對細(xì)胞無毒性影響,、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品,。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療,、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè),。

THP-1細(xì)胞培養(yǎng)秘籍給有需要的您

會員登錄

收藏該商鋪

提示