RAW264.7細胞太容易分化,，到底怎樣才能養(yǎng)好它？

時間：2021/12/2閱讀：4307

養(yǎng)好RAW 264.7之基礎(chǔ)篇

養(yǎng)好RAW 264.7的第一步,，是要對它的基礎(chǔ)培養(yǎng)條件了如指掌,，比如生長特性、細胞形態(tài),、所需的培養(yǎng)基,，甚至培養(yǎng)環(huán)境、傳代比例等等,，做到知己知彼,，才能百戰(zhàn)百勝。

細胞名稱	RAW 264.7 (小鼠單核巨噬細胞白血病細胞)
細胞別稱	RAW264; RAW2647; RAW 264.7; RAW-264.7; Raw 264.7; RAW 264.7
種屬	小鼠（雄性,，成年BALB/c鼠）
組織來源	Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤
生長特性	貼壁細胞
細胞形態(tài)	不規(guī)則形（圓形,、短梭形）
生長培養(yǎng)基	DMEM＋10% FBS＋1% P/S
培養(yǎng)環(huán)境	氣相：95%空氣；5%CO2 溫度：37℃
推薦傳代比例	1:3 - 1:6
凍存液配方	55% DMEM+40% FBS+5% DMSO

▲RAW 264.7生長圖片

養(yǎng)好RAW 264.7之進階篇1

除了基礎(chǔ)條件,，其他外界因素也容易引起細胞的“小脾氣",，比如運輸路上的顛簸、傳代方法等等,。針對幾種常見的問題,，小普來一一為大家解答。

問題1 ：收貨后,，細胞不見了

小普總是會收到這類反饋：收到細胞,，期待值滿滿地打開包裝,，但在顯微鏡下卻找不到細胞！

這是因為RAW 264.7 細胞貼壁較松,，快遞運輸路上受到顛簸,，可能會脫落。脫落的細胞懸浮在培養(yǎng)基中不容易聚焦,。

這時候不用擔心,，把細胞放進培養(yǎng)箱靜置兩個小時就可以看到了。

如果靜置后看到的細胞仍偏少,，請將瓶子里的培養(yǎng)基都轉(zhuǎn)移到離心管里,，1200rpm（約250g）離心3分鐘，即可看到沉淀的細胞,。

細胞全部脫落,，慌亂之下可能會一個細胞都找不著。這個時候離心驗證是較為合適的方法,。

問題2 ：收貨處理后，細胞不貼壁

將細胞離心收集,，用新鮮的培養(yǎng)基重懸細胞放到新的培養(yǎng)瓶里之后,，可能會出現(xiàn)細胞成團漂浮、不貼壁的情況,。

這種情況下,，把細胞離心收集，用1mL培養(yǎng)基重懸,，慢慢地,，輕輕地吹打，直到細胞被吹成單細胞,，就可以重新鋪板了,。

RAW 264.7脫落后傾向于抱團，抱團時細胞是活著的,，但很難貼壁,。記得一定要把聚成團的細胞吹散成單細胞，不然細胞很難重新貼壁,。

養(yǎng)好RAW 264.7之進階篇2

正確的傳代方法是養(yǎng)好RAW 264.7的關(guān)鍵,，每一步操作都要細致入微，稍有不慎細胞就分化了,。

RAW 264.7不能用胰酶消化,，許多實驗室用細胞刮傳代，這是一種非常經(jīng)典好用的方法。

小普在養(yǎng)RAW 264.7細胞這十幾年里,，摸索出一個更不錯的方法：吹打傳代,。

吹打傳代操作簡單，對養(yǎng)細胞的萌新們更友好,，也能更好地控制細胞分化率,。

吹打傳代步驟

輕拍幾下培養(yǎng)皿

用1ml 的槍或者巴氏管把細胞吹下來（吹不下來的舍棄）

細胞吹下來后轉(zhuǎn)移到15ml離心管

1200rpm(約250g) 離心3min

去上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸細胞

按比例接種到新的培養(yǎng)皿中

吹打傳代時機

吹打傳代時機

當細胞密度較低的時候,，可能不太好吹下來,。

當細胞密度達到80%~90%的時候，最容易吹下,。

▲推薦傳代的密度

養(yǎng)好RAW 264.7之終結(jié)篇

講了那么多如何處理RAW 264.7分化的情況,，那分化了的細胞到底是什么形態(tài)呢？

分化的RA264.7

分化的細胞呈多角形,，體積明顯增大,，時常有較長的黑色觸角。

注意事項

RAW 264.7細胞三天不傳代更容易分化,，很難吹下,，每一次接種密度都要控制好；

分化的細胞貼壁牢固,，傳代的時候請勿強制性吹下這些細胞,，只接種容易吹下的那些未分化細胞；

吹打的力度一定要輕,，切勿暴力吹打,；

細胞的貼壁性和培養(yǎng)器皿的材料也有關(guān),，有時RAW 264.7 會出現(xiàn)太容易吹下的情況,，連分化細胞都貼壁較松，此時更適宜用巴氏管吹打,；

培養(yǎng)時,，無法保證100% 不分化，通過傳代可以將分化比例控制在一定范圍,；

RAW 264.7分裂活躍，記得每天看一看,，周末也要抽點時間關(guān)心一下它哦~

養(yǎng)細胞不易,，每個細胞對我們而言,，都像是寶寶,，含在嘴里怕化了,，捧在手里怕摔了。

正是因為對科研的無畏堅持，讓我們更有力量接受考驗,，因為科研本身，值得敬畏和付出,。

RAW 264.7的起源

加利福尼亞索爾克研究所的W. C. Raschke在雄性BAB/14小鼠腹腔注射A-MuLV（Abelson鼠科白血病病毒）誘發(fā)腫瘤的腹水中建立了RAW 264細胞系,。

他發(fā)現(xiàn)RAW 264可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖，并且能通過抗體依賴途徑分解綿羊紅血球與腫瘤靶細胞,。

RAW 264.7不分泌A-MuLV（但用Moloney MuLV 拯救后可以在上清檢測到病毒）,，對LPS非常敏感,。該研究1978年發(fā)表在《CELL》雜志,。

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