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當前位置：深圳市安培生物科技有限公司>>技術文章>>qPCR實驗為什么要制作熔解曲線,？
熒光DNA結合染料法的缺點是它們能在反應中結合所有DNA雙鏈,，包括在實時熒光PCR中產(chǎn)生的引物二聚體,，和其他非特異性產(chǎn)物,，引起大量的背景噪聲信號。
這種噪聲會影響我們對靶基因產(chǎn)量的評估,，甚至熒光強度和靶基因的起始量,、全長根本沒什么關系。
因此,，我們使用熒光DNA染料結合法時,，需要對擴增產(chǎn)物進行熔解曲線的分析。通過對擴增反應產(chǎn)物逐漸升溫,，同時監(jiān)測每一步的熒光信號來制作熔解曲線,。
熔解曲線的縱坐標是熒光信號值,，橫坐標是溫度值,。通過觀察產(chǎn)生的信號峰和對應溫度，可以判斷產(chǎn)物狀態(tài),。
理想情況下,，熔解曲線應該是單峰，峰值對應溫度是特異性產(chǎn)物的退火溫度,，這才能說明擴增產(chǎn)物中特異性產(chǎn)物占比大,。熒光DNA結合染料法的缺點是它們能在反應中結合所有DNA雙鏈，包括在實時熒光PCR中產(chǎn)生的引物二聚體,，和其他非特異性產(chǎn)物,，引起大量的背景噪聲信號。
這種噪聲會影響我們對靶基因產(chǎn)量的評估，甚至熒光強度和靶基因的起始量,、全長根本沒什么關系,。
因此，我們使用熒光DNA染料結合法時,，需要對擴增產(chǎn)物進行熔解曲線的分析,。通過對擴增反應產(chǎn)物逐漸升溫，同時監(jiān)測每一步的熒光信號來制作熔解曲線,。
熔解曲線的縱坐標是熒光信號值,，橫坐標是溫度值。通過觀察產(chǎn)生的信號峰和對應溫度,，可以判斷產(chǎn)物狀態(tài),。
理想情況下，熔解曲線應該是單峰,，峰值對應溫度是特異性產(chǎn)物的退火溫度,，這才能說明擴增產(chǎn)物中特異性產(chǎn)物占比大。
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