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磷酸鈣介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法應(yīng)用于將外源DNA轉(zhuǎn)入培養(yǎng)的細(xì)胞,已有45年以上的歷史,。Graham和van der Eb在磷酸鈣存在下,,將病毒DNA導(dǎo)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞的這一工作,,為基因在多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞中進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá)奠定基礎(chǔ)。
因此,,即使脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法是我們首先選擇,,依然有很多實(shí)驗(yàn)員在使用磷酸鈣介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染。
他的主要原理是,,磷酸鈣與DNA形成不可溶的沉淀物,,即磷酸鈣-DNA復(fù)合物,吸附于細(xì)胞膜表面,,通過細(xì)胞的內(nèi)吞作用或吞噬作用,,進(jìn)入細(xì)胞中。磷酸鈣起到促進(jìn)DNA進(jìn)入的細(xì)胞的作用,。
磷酸鈣介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法的優(yōu)點(diǎn):
1,、細(xì)胞毒性低
2、可轉(zhuǎn)染大質(zhì)粒
3,、操作簡(jiǎn)單
4,、成本非常低廉。
但具有以下缺點(diǎn):
1,、由于試劑的PH值對(duì)沉淀形成有巨大影響,,對(duì)于不同核酸需要調(diào)整方案
2、有時(shí)會(huì)表現(xiàn)出免疫原性
3,、對(duì)原代細(xì)胞無(wú)效
4,、不能在細(xì)胞培養(yǎng)基中制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物。
在使用上有很多需要注意的地方,,這可能也是在生化方法中,,脂質(zhì)的優(yōu)先級(jí)別更高的理由
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