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共轉化,,篩選轉染細胞的實用工具

時間:2021/10/11閱讀:1463
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想要達到轉染的目的,,即分析轉染基因的功能和表達,需要轉染的基因穩(wěn)定整合進入宿主染色體,。


根據(jù)細胞類型,,細胞群體中,最高有80%的細胞,,以瞬時表達的方式表達轉染的基因,。但對于穩(wěn)定轉染,好的情況,,也只有1/1000的成功率——細胞能穩(wěn)定表達轉染的基因,。


所以,我們需要通過篩選活的新表型(標記)的細胞,,來分離穩(wěn)定轉染體,。方法是將標記的基因和待轉染的基因進行重組、連接,,共同轉染到細胞核內,。這種物理上沒有關聯(lián)的基因整合成1個序列,并在同一轉化細胞內表達的這種現(xiàn)象,,叫做共轉化,。


那么,篩選具體是如何進行的呢,?


一般情況下,,這個標記是某種編碼抗生素抗性的基因,和待轉染基因一起在細胞上表達,,如第一個在哺乳動物細胞上廣泛使用的篩選基因,,編碼胸苷激酶(TK)的病毒基因。


待轉染的細胞系,,是不含TK的哺乳動物細胞系,,在轉染成功后,才會變成含TK的細胞系,,才能在氨基嘌呤存在的培養(yǎng)基中生存,。


因此,共轉化是一個篩選細胞的實用方法,。


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