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當(dāng)前位置：深圳市安培生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>共轉(zhuǎn)化，篩選轉(zhuǎn)染細(xì)胞的實(shí)用工具
想要達(dá)到轉(zhuǎn)染的目的,，即分析轉(zhuǎn)染基因的功能和表達(dá)，需要轉(zhuǎn)染的基因穩(wěn)定整合進(jìn)入宿主染色體,。
根據(jù)細(xì)胞類型,，細(xì)胞群體中，最高有80%的細(xì)胞,，以瞬時(shí)表達(dá)的方式表達(dá)轉(zhuǎn)染的基因,。但對(duì)于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，好的情況,，也只有1/1000的成功率——細(xì)胞能穩(wěn)定表達(dá)轉(zhuǎn)染的基因,。
所以，我們需要通過篩選活的新表型（標(biāo)記）的細(xì)胞,，來分離穩(wěn)定轉(zhuǎn)染體,。方法是將標(biāo)記的基因和待轉(zhuǎn)染的基因進(jìn)行重組、連接,，共同轉(zhuǎn)染到細(xì)胞核內(nèi),。這種物理上沒有關(guān)聯(lián)的基因整合成1個(gè)序列，并在同一轉(zhuǎn)化細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的這種現(xiàn)象,，叫做共轉(zhuǎn)化,。
那么，篩選具體是如何進(jìn)行的呢,？
一般情況下,，這個(gè)標(biāo)記是某種編碼抗生素抗性的基因，和待轉(zhuǎn)染基因一起在細(xì)胞上表達(dá),，如第一個(gè)在哺乳動(dòng)物細(xì)胞上廣泛使用的篩選基因,，編碼胸苷激酶（TK）的病毒基因。
待轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系,，是不含TK的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系,，在轉(zhuǎn)染成功后，才會(huì)變成含TK的細(xì)胞系,，才能在氨基嘌呤存在的培養(yǎng)基中生存,。
因此，共轉(zhuǎn)化是一個(gè)篩選細(xì)胞的實(shí)用方法。
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