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想要達(dá)到轉(zhuǎn)染的目的,,即分析轉(zhuǎn)染基因的功能和表達(dá),,需要轉(zhuǎn)染的基因穩(wěn)定整合進(jìn)入宿主染色體。
根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型,,細(xì)胞群體中,,最高有80%的細(xì)胞,以瞬時(shí)表達(dá)的方式表達(dá)轉(zhuǎn)染的基因,。但對(duì)于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,,好的情況,也只有1/1000的成功率——細(xì)胞能穩(wěn)定表達(dá)轉(zhuǎn)染的基因,。
所以,,我們需要通過(guò)篩選活的新表型(標(biāo)記)的細(xì)胞,來(lái)分離穩(wěn)定轉(zhuǎn)染體。方法是將標(biāo)記的基因和待轉(zhuǎn)染的基因進(jìn)行重組,、連接,,共同轉(zhuǎn)染到細(xì)胞核內(nèi)。這種物理上沒(méi)有關(guān)聯(lián)的基因整合成1個(gè)序列,,并在同一轉(zhuǎn)化細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的這種現(xiàn)象,,叫做共轉(zhuǎn)化。
那么,,篩選具體是如何進(jìn)行的呢,?
一般情況下,,這個(gè)標(biāo)記是某種編碼抗生素抗性的基因,,和待轉(zhuǎn)染基因一起在細(xì)胞上表達(dá),如第一個(gè)在哺乳動(dòng)物細(xì)胞上廣泛使用的篩選基因,,編碼胸苷激酶(TK)的病毒基因,。
待轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系,是不含TK的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系,,在轉(zhuǎn)染成功后,,才會(huì)變成含TK的細(xì)胞系,才能在氨基嘌呤存在的培養(yǎng)基中生存,。
因此,,共轉(zhuǎn)化是一個(gè)篩選細(xì)胞的實(shí)用方法。
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