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如何提高磷酸鈣轉(zhuǎn)染的效率？

時(shí)間：2021/10/11閱讀：1750
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提高磷酸鈣轉(zhuǎn)染法效率的共通步驟,，目的都是為了避免產(chǎn)生會被細(xì)胞內(nèi)吞,、加工失效的大顆粒沉淀。


提高轉(zhuǎn)染效率的操作有以下這些：

1,、將小分子DNA整合在高分子質(zhì)量基因組DNA上,，以大分子作為運(yùn)載體，能提高轉(zhuǎn)染效率,。


2,、測試緩沖液適合的ph，可制備幾批pH范圍為6.90～7.15的HEPES鹽緩沖液,，分別測試緩沖效率,，找到最適pH值。


3,、使用轉(zhuǎn)染促進(jìn)劑,，如甘油、氯喹,、其他可購買的轉(zhuǎn)染促進(jìn)劑,。因?yàn)檫@些試劑對細(xì)胞有一定毒性，因此,，應(yīng)針對每種細(xì)胞系通過實(shí)驗(yàn)確定轉(zhuǎn)染促進(jìn)劑處理的最佳時(shí)機(jī),、時(shí)長和強(qiáng)度,。


除了這些共通的步驟，不同廠家還會對混勻DNA和磷酸鈣的速度有要求,。有些方法要求只能輕輕攪動,，有些建議用移液器溫和吹吸混勻，有些則提倡應(yīng)緩慢混合,。


因此,，在使用磷酸鈣轉(zhuǎn)染時(shí)，應(yīng)針對不同試劑和細(xì)胞系,，耐心調(diào)整實(shí)驗(yàn)參數(shù),，才是獲得高轉(zhuǎn)染效率的關(guān)鍵。


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