電穿孔法難點(diǎn)在于提高電穿孔的效率,。實(shí)驗(yàn)操作者一般能從電轉(zhuǎn)儀廠家得到轉(zhuǎn)染的詳細(xì)方案和優(yōu)化指導(dǎo),。當(dāng)你需要自己優(yōu)化轉(zhuǎn)染效率時(shí)，可以從以下方面進(jìn)行：

1,、外加電場(chǎng)的強(qiáng)度：電壓過(guò)低,，細(xì)胞膜不能形成小孔，使得外源分子通過(guò),；電壓過(guò)高,，細(xì)胞會(huì)受到不可逆損傷，以至于裂解,。對(duì)于大部分哺乳細(xì)胞來(lái)說(shuō),，電壓250～500V/cm是合適的。實(shí)驗(yàn)操作者需要查詢資料,，找到所需細(xì)胞系轉(zhuǎn)染的合適電場(chǎng)強(qiáng)度,。

這部分的操作建議通過(guò)逐級(jí)增加電壓來(lái)確定*佳轉(zhuǎn)染電場(chǎng)強(qiáng)度。

2,、電脈沖時(shí)間的長(zhǎng)短：一般電脈沖只進(jìn)行1次,。根據(jù)電轉(zhuǎn)儀的具體參數(shù)設(shè)置，不同儀器間差異較大,。

3、溫度：細(xì)胞在室溫時(shí)電轉(zhuǎn)染,，瞬時(shí)表達(dá)水平*高,；對(duì)于高強(qiáng)度電轉(zhuǎn)，產(chǎn)生大量熱量的實(shí)驗(yàn)來(lái)說(shuō),，將細(xì)胞保持在0°C較好,，但電轉(zhuǎn)染后需要室溫孵育一段時(shí)間。

4,、DNA：線性DNA比環(huán)形DNA的轉(zhuǎn)染效率高,，合適濃度是1～40μg/mL。使用質(zhì)粒時(shí),，需要提高質(zhì)粒的純度,。

5、培養(yǎng)基：用緩沖鹽溶液（HEPES鹽緩沖液）懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率較高,，比使用含非離子物質(zhì)（甘露糖,、蔗糖）的緩沖液高數(shù)倍,。

6、細(xì)胞狀態(tài)：最好使用生長(zhǎng)活躍,、狀態(tài)健康,、無(wú)污染、傳代次數(shù)低的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染,。