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當前位置：深圳市安培生物科技有限公司>>技術文章>>怎么提高電穿孔法轉染的效率,？
電穿孔法難點在于提高電穿孔的效率。實驗操作者一般能從電轉儀廠家得到轉染的詳細方案和優(yōu)化指導,。當你需要自己優(yōu)化轉染效率時,，可以從以下方面進行：
1、外加電場的強度：電壓過低,，細胞膜不能形成小孔,，使得外源分子通過；電壓過高,，細胞會受到不可逆損傷,，以至于裂解。對于大部分哺乳細胞來說,，電壓250～500V/cm是合適的,。實驗操作者需要查詢資料，找到所需細胞系轉染的合適電場強度,。
這部分的操作建議通過逐級增加電壓來確定*佳轉染電場強度,。
2、電脈沖時間的長短：一般電脈沖只進行1次,。根據電轉儀的具體參數設置,，不同儀器間差異較大。
3,、溫度：細胞在室溫時電轉染,，瞬時表達水平*高；對于高強度電轉,，產生大量熱量的實驗來說,，將細胞保持在0°C較好，但電轉染后需要室溫孵育一段時間,。
4,、DNA：線性DNA比環(huán)形DNA的轉染效率高，合適濃度是1～40μg/mL,。使用質粒時,，需要提高質粒的純度,。
5、培養(yǎng)基：用緩沖鹽溶液（HEPES鹽緩沖液）懸浮細胞的轉染效率較高,，比使用含非離子物質（甘露糖,、蔗糖）的緩沖液高數倍。
6,、細胞狀態(tài)：最好使用生長活躍,、狀態(tài)健康、無污染,、傳代次數低的細胞進行轉染,。
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