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電穿孔法轉(zhuǎn)染如此“萬能”,,為什么還要用其他方法?

時間:2021/10/9閱讀:2100
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同學(xué)們在進(jìn)行轉(zhuǎn)染時,,肯定被各種各樣的轉(zhuǎn)染試劑挑花了眼吧,。商業(yè)化的轉(zhuǎn)染試劑通常針對多重細(xì)胞類型、不同的核酸和各種特定的用途,,也就是說,,你要從種類繁多的試劑中挑選適合你的。


這時候,,電穿孔法轉(zhuǎn)染就進(jìn)入了我們的視野,。


電穿孔法轉(zhuǎn)染原理是通過脈沖電場,使得細(xì)胞膜上產(chǎn)生小孔,,通透性被暫時的提高,。周圍的小分子穿過小孔,擴(kuò)散到細(xì)胞內(nèi),。理論上說,,電穿孔法轉(zhuǎn)染是可以對任何細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染,可以轉(zhuǎn)染DNA,、RNA,、蛋白、糖類等,,也不需要特殊的試劑,。


但為什么還是有很多實(shí)驗(yàn)者選擇了脂質(zhì)體介導(dǎo)法等方案呢?原因如下

1、電穿孔法雖然不需要特殊試劑,,但需要購買昂貴的電轉(zhuǎn)儀,。


2、電穿孔法轉(zhuǎn)染會殺死細(xì)胞,,因此需要較多的細(xì)胞和外源分子,。


3,、電穿孔法對實(shí)驗(yàn)者的操作水平要求較高,。過低的電場強(qiáng)度、過長的電脈沖時間,,會裂解細(xì)胞,;電壓過低,過短的電脈沖時間則會降低轉(zhuǎn)染效率,。


因此,,電穿孔法不是真正的“萬能",實(shí)驗(yàn)上也需要多學(xué)習(xí),、優(yōu)化,。


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