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當前位置:深圳市安培生物科技有限公司>>技術文章>>我的脂質體轉染實驗效率低,,怎么辦,?
脂質體介導轉染實驗指的是,,脂質包裹待轉染DNA形成復合體,,與細胞膜融合或內吞,進入細胞,。然而,,大量的脂質體-DNA復合體,只有一小部分能運送到細胞質并進入細胞核中,。
如何提高脂質體介導轉染效率的關鍵,,就在這一步:提高復合體進入細胞質的效率。
1,、避免使用陰離子試劑,,使用新一代聚陽離子試劑,適用范圍廣,,毒性相較以前的脂質試劑小,。
2、使用陽離子脂質與DNA的*佳比例,,以及一定數(shù)量細胞的陽離子脂質用量,。可向購買試劑的公司進行詢問,。
這是因為過量的脂質容易受到培養(yǎng)皿中其他帶電荷物質的干擾,,如細胞外基質中的硫酸軟骨素。
3,、待轉染的培養(yǎng)細胞應該從凍存庫中重新培養(yǎng),。轉染過程中,細胞在匯合狀態(tài)不應超過24小時,,單層細胞應處于對數(shù)中期,。
4、轉染過程中,,培養(yǎng)基不建議加入抗生素,。轉染試劑使細胞通透性增加,進入細胞的抗生素濃度增加,,會產(chǎn)生一定的細胞毒性,。
5、某些血清蛋白可能會干擾脂質體-DNA復合體形成,,因此應在無血清狀態(tài)下形成復合體,,后續(xù)過程可添加血清。
6,、提高待轉染基因的純度,,DNA的260nm:280nm應為1.8 ,。
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