當(dāng)在生長培養(yǎng)基中進(jìn)行單懸浮細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，樣本中出現(xiàn)細(xì)胞丟失的情況并不少見,。當(dāng)細(xì)胞破裂時(shí),，它們會(huì)釋放DNA和碎片，導(dǎo)致細(xì)胞聚集成大團(tuán)塊,，使其難以擴(kuò)張,。細(xì)胞聚團(tuán)既可導(dǎo)致細(xì)胞凋亡，也可引起細(xì)胞死亡,。

隨著更多的細(xì)胞死亡并釋放碎片,，問題將繼續(xù)惡化。盡可能快地處理或避免細(xì)胞聚團(tuán)將有利于實(shí)驗(yàn)的后續(xù)結(jié)果,。

為什么細(xì)胞聚團(tuán)是個(gè)問題,？

單細(xì)胞懸浮培養(yǎng)基的目標(biāo)是為靶細(xì)胞提供盡可能多的生長資源。這包括充足的生長營養(yǎng)和充足的繁殖空間,。當(dāng)細(xì)胞聚集在一起時(shí),，它們會(huì)相互限制，降低細(xì)胞對營養(yǎng)吞吐量,，最終影響生長結(jié)果,。

細(xì)胞聚團(tuán)也會(huì)導(dǎo)致靶細(xì)胞的回收率降低，并且會(huì)干擾標(biāo)記,，這也是懸浮細(xì)胞標(biāo)記的成功率不高的原因,，某些細(xì)胞分析方法，如流式細(xì)胞術(shù),，需要對細(xì)胞進(jìn)行適當(dāng)?shù)姆蛛x,。在流式細(xì)胞術(shù)中，大量細(xì)胞以快速的液流通過機(jī)器,。這臺被稱為細(xì)胞儀的機(jī)器檢測不同細(xì)胞之間物理特性的差異,，并使用熒光燈對它們進(jìn)行相應(yīng)的標(biāo)記。如果細(xì)胞通過試管時(shí)聚集在一起,，細(xì)胞儀將很難準(zhǔn)確測量它們的特性,。這會(huì)導(dǎo)致它們被不正確地分類,，并對實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生負(fù)面影響。

細(xì)胞聚團(tuán)的原因

防止細(xì)胞聚團(tuán)的最佳方法之一是了解是什么導(dǎo)致了細(xì)胞聚集,，并采取預(yù)防措施避免這些事件的發(fā)生,。培養(yǎng)物中細(xì)胞可能聚集的一些原因包括： 

1.過度消化-某些用于組織分解的酶，如胰蛋白酶,，如果過量使用會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)塊

2.環(huán)境壓力-物理壓力和反復(fù)的溫度變化會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡,，從而導(dǎo)致細(xì)胞的“粘性"的DNA分子將相鄰的細(xì)胞連接在一起

3.組織分解-在制備單細(xì)胞懸浮液時(shí)，使用酶,、機(jī)械或化學(xué)分解策略可使細(xì)胞破裂,，從而導(dǎo)致碎片的聚團(tuán),。 

4.過度生長-當(dāng)細(xì)胞在其培養(yǎng)基中密度過大的時(shí)候,，細(xì)胞將開始溶解并釋放碎片，碎片中的粘性因子會(huì)將細(xì)胞聚集到一起

5.污染-某些細(xì)菌和真菌病原體導(dǎo)致細(xì)胞溶解,；結(jié)塊通常是細(xì)胞培養(yǎng)物被污染的跡象

6.雖然其中一些是由于實(shí)驗(yàn)錯(cuò)誤而發(fā)生的,，但實(shí)際也有部分的細(xì)胞具有天生的聚團(tuán)現(xiàn)象，比如大部分的半懸浮細(xì)胞,，BV-2 ,NCI-H716等等,，半懸浮細(xì)胞一般在在整體匯合度70%左右就要進(jìn)行傳代操作了，這樣可以降低細(xì)胞聚成大團(tuán)塊的風(fēng)險(xiǎn),。

怎么減少細(xì)胞聚團(tuán),？

1. 在開始實(shí)驗(yàn)之前，可以采取一些措施來防止細(xì)胞聚集,。例如,，一種名為DNA酶I的內(nèi)切酶可以混合到培養(yǎng)基中，從破裂的細(xì)胞中分離DNA,。分解這些多余的碎片有助于保持靶細(xì)胞生長的空間,。然而，dna酶I使用過多會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞突變,，最終會(huì)影響您的實(shí)驗(yàn)效果,，所以實(shí)在不是逼不得已，不建議使用,。

2. 通過適當(dāng)?shù)奶幚砗驮O(shè)備使用,，也可以減少結(jié)塊。如果使用離心機(jī)分離或混合樣品,，將其設(shè)置為正確的速度可以減少聚團(tuán),，通常情況下，較快的速度可以離心散細(xì)胞,，但在高速下也必須考慮細(xì)胞的脆弱性,，所以適當(dāng)?shù)难娱L離心的時(shí)間也不失為一種穩(wěn)靠的離心散懸浮聚團(tuán)細(xì)胞的方法

3.還有一些方法可以分離細(xì)胞,，這些細(xì)胞聚集在一起，不會(huì)造成過度的傷害,。某些叫做螯合劑的化學(xué)物質(zhì)與正電荷離子有親和力,。根據(jù)細(xì)胞聚團(tuán)的性質(zhì)，可以添加螯合劑來溶解它們之間的粘連,，而不會(huì)傷害細(xì)胞,。乙二胺四乙酸（EDTA）是一種螯合劑，常用于溶解鈣粘連,。 

4.另一種細(xì)胞清除方法是氚化,。氚化過程涉及到溫和、重復(fù)的吸管,，以打破細(xì)胞間的弱粘連,。