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① 跑到溴酚藍距離最下緣 25px 時配電轉液（tris3.03g，甘氨酸 14.4g,，甲醇 100ml，定容至 1L）
② 在電轉液中剝膠,，裁膠，剪膜,，膜活化（甲醇 1min,，去離子水 1min，電解液 15min）
③ “三明治"黑板~海綿~三層濾紙~膠~膜（正面朝下,，分清左右,，與膠對應）~3 層濾紙~海綿 ~白板,，夾緊后放入電轉槽中。（海綿,，濾紙,，膜需浸潤透，過程中不能干,，趕趕氣泡）
④ 連接電源,，一定要注意紅對紅，黑對黑,，定電流和時間（150mA,，1h，若分子量大于 90,， 再加 200mA,，2h）具體情況具體分析
經(jīng)驗總結：
溴酚藍跑到最終的距離是根據(jù)你所需要切的分子量決定的，假如你就只需要切一條 ACTIN(43Kda)這樣的,，你*只需要跑到下膠,，看到差不多 marker 分開了就可以切膠了。假如你要從最上到最下切好多條出來,，你則需要把溴酚藍盡量跑到最下面,，這樣 marker 容易被跑開，有利于切膠,。濾紙和 PVDF 膜的裁剪必須要整齊,，干凈，標記清晰,。 PVDF 膜型號的選擇要正確,。如正常的 30~170kDa 的分子一般需要孔徑 0.45mm 的膜就足夠了。太小的則需要選擇孔徑為 0.22mm 的膜,。關于轉膜是否要加 SDS 的問題,。SDS 帶負電，加 SDS 一般是針對那些分子量大的 WB,，加入 SDS 可以增加分子導電性,，這樣更利于轉膜。 關于轉膜電流,，分子是否能夠轉過去和轉膜時間沒有必要關系,，而更在于轉膜電流的大小。 舉個例子,，200kDa 的分子量,，你用 90mAh 就算轉一年都轉不過去,。
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