① 跑到溴酚藍(lán)距離最下緣 25px 時配電轉(zhuǎn)液（tris3.03g，甘氨酸 14.4g,，甲醇 100ml,，定容至 1L） 

② 在電轉(zhuǎn)液中剝膠，裁膠,，剪膜,，膜活化（甲醇 1min，去離子水 1min,，電解液 15min） 

③ “三明治"黑板~海綿~三層濾紙~膠~膜（正面朝下,，分清左右，與膠對應(yīng)）~3 層濾紙~海綿 ~白板,，夾緊后放入電轉(zhuǎn)槽中,。（海綿，濾紙,，膜需浸潤透,，過程中不能干，趕趕氣泡） 

④ 連接電源,，一定要注意紅對紅,，黑對黑，定電流和時間（150mA,，1h,，若分子量大于 90， 再加 200mA,，2h）具體情況具體分析

經(jīng)驗(yàn)總結(jié)： 

溴酚藍(lán)跑到最終的距離是根據(jù)你所需要切的分子量決定的，假如你就只需要切一條 ACTIN(43Kda)這樣的,，你*只需要跑到下膠,，看到差不多 marker 分開了就可以切膠了。假如你要從最上到最下切好多條出來,，你則需要把溴酚藍(lán)盡量跑到最下面,，這樣 marker 容易被跑開,，有利于切膠。濾紙和 PVDF 膜的裁剪必須要整齊,，干凈,，標(biāo)記清晰。 PVDF 膜型號的選擇要正確,。如正常的 30~170kDa 的分子一般需要孔徑 0.45mm 的膜就足夠了,。太小的則需要選擇孔徑為 0.22mm 的膜。關(guān)于轉(zhuǎn)膜是否要加 SDS 的問題,。SDS 帶負(fù)電,，加 SDS 一般是針對那些分子量大的 WB，加入 SDS 可以增加分子導(dǎo)電性,，這樣更利于轉(zhuǎn)膜,。 關(guān)于轉(zhuǎn)膜電流，分子是否能夠轉(zhuǎn)過去和轉(zhuǎn)膜時間沒有必要關(guān)系,，而更在于轉(zhuǎn)膜電流的大小,。 舉個例子，200kDa 的分子量,，你用 90mAh 就算轉(zhuǎn)一年都轉(zhuǎn)不過去,。