您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng),！ 登錄| 免費(fèi)注冊| 產(chǎn)品展廳| 收藏商鋪|
您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng),！ 登錄| 免費(fèi)注冊| 產(chǎn)品展廳| 收藏商鋪|
19126518388
當(dāng)前位置：深圳市安培生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>WB的免疫印跡操作分享
①膜處理（甲醇 1min,，風(fēng)干（放濾紙上）,，甲醇 1min,，水 1min）
② 封閉（用 TBST 配 5%牛奶）1h 配搖床
③ 加一抗,，牛奶稀釋,所需濃度參考抗體說明書,，看膜的大小配多少一抗，4°過夜,。
④ 室溫孵育 20min
⑤ 0.1%TBST 洗 10min x 3 次配搖床（0.1%TBST：tris12.1g,，NaCl87.66g，HCl 至 PH7.6 后定容至 1L 后,，加入 1ml 的 TWEEN20）
⑥ 加二抗,，牛奶稀釋，一般 1:10000,，1h 配搖床
⑦ 0.1%TBST 洗 10min x 3 次配搖床
⑧ 發(fā)光（A 液 B 液等體積混合,，孵膜 1min,，正面朝上放入儀器內(nèi)發(fā)光）
經(jīng)驗(yàn)總結(jié)：
封閉液的選取具體得看抗體說明書，有的抗體是明確要求只能用 BSA,，而且封閉液濃度的選擇也是具體得看抗體的要求,，但是一般情況 5%BSA 的效果會比 5%牛奶要好。 信號通路一般都是用 5%BSA 封閉,。 信號通路在洗膜的時候用快速搖床 5min/次 3 次就可以了,。 如果你想省時間，一抗可以放在 37℃1~2hour,，但是一定要封好,，以免溫度太高而導(dǎo)致抗體 干了出現(xiàn)假陽性。二抗可以 37℃半個小時,。 發(fā)光液的選取,，如果是一般的抗體，建議用一般的發(fā)光液效果會好一點(diǎn),，如 keygen 的,，背景會比較干凈。但是一些難發(fā)出來的一般建議用靈敏度更高的發(fā)光液如 FD 的或者是 MILLIPORE 之類的發(fā)光液,。
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗(yàn)證碼
以上信息由企業(yè)自行提供，信息內(nèi)容的真實(shí)性,、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé)，化工儀器網(wǎng)對此不承擔(dān)任何保證責(zé)任,。
溫馨提示：為規(guī)避購買風(fēng)險(xiǎn),，建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。
