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   大鼠原代乳腺上皮細(xì)胞分離自乳腺組織；乳腺是復(fù)管泡狀皮膚腺,，主要由腺上皮細(xì)胞組成,，并具有特殊的泌乳功能。在妊娠期,，導(dǎo)管末梢發(fā)育成腺泡,；近年來(lái)的許多研究都表明乳腺癌、乳腺炎等的發(fā)生都與乳腺上皮細(xì)胞(MEC)有密切聯(lián)系,，體外分離培養(yǎng)MECs即成為研究開(kāi)展的關(guān)鍵步驟,。乳腺是乳房的腺體組織，乳腺由導(dǎo)管和腺泡組成,，腺泡是分泌乳汁的重要部分,。乳腺的正常發(fā)育是由體內(nèi)激素和局部合成的生長(zhǎng)因子共同調(diào)控，其中乳腺表達(dá)的生長(zhǎng)因子對(duì)乳腺上皮細(xì)胞的增殖,、分化,、凋亡產(chǎn)生極大的影響。乳腺上皮細(xì)胞分離自分娩后3-5天的乳腺組織,，為貼壁生長(zhǎng)型細(xì)胞,，呈多角形、圓形以及短梭形,；乳腺上皮細(xì)胞主要功能即生乳功能,。

　　大鼠原代乳腺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)方法：

　　1.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。

　　2.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

　　3.將細(xì)胞懸液按1：2比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

　　大鼠原代乳腺上皮細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。

　　1.細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后,，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

　　2.4 min 1000rpm離心去掉上清,。加1ml血清重懸細(xì)胞,，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻,，DMSO終濃度為10%,，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液,，注意凍存管做好標(biāo)識(shí),。

　　3.將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱,，2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。