日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司

PriCells: 正常人甲狀腺細(xì)胞的原代培養(yǎng)方法

時間:2021-10-20 閱讀:189
分享:
PriCells: 正常人甲狀腺細(xì)胞的原代培養(yǎng)方法                                                                                   PDF下載
 
實(shí)驗(yàn)材料:
1.      甲狀腺細(xì)胞材料來源:人孤立性良性甲狀腺腺瘤旁邊正常組織,、甲狀腺功能亢進(jìn)甲狀腺組織或甲狀腺腫瘤組織均可作為研究的材料,;
2.      不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,添加200000IU/L青霉素,、200mg/L鏈霉素,,pH7.2;
3.      培養(yǎng)用液:DMEM培養(yǎng)液,,含15%—20%小牛血清,、0.6mmol/L的HEPES、12.5mmol/L的谷氨酰胺,、100IU/ml青霉素,、100μg/ml鏈霉素。用5.6%的NaHCO3溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0左右,;
4.      消化液:0.25%胰蛋白酶溶液,;
5.      培養(yǎng)器具:培養(yǎng)瓶或皿、孔徑為100μm的不銹鋼網(wǎng)篩,、眼科剪,、鑷子等;
 
培養(yǎng)方法:
1.將所取材料放入加有PBS的無菌容器中,,立即送至培養(yǎng)室,,時間不超過30min。若不能立即培養(yǎng),,可放在培養(yǎng)液站,,置4℃下保存,但時間不炒股4h為宜,;
2.在無菌條件下,,將組織移至平皿內(nèi),用PBS洗滌2—3次,。用眼科鑷剝離去除被膜及結(jié)締組織,,并擠壓出其中的血液成分;
3.用眼科剪將組織剪成1mm3大小的勻漿狀,,移入瓶內(nèi),。加入比細(xì)胞多5—10倍量的消化液,于37℃水浴條件下消化30—60min,。每隔5—10min搖動1次,;
4.消化完畢,,加入冷的PBS終止消化,。通過孔徑100μm的不銹鋼網(wǎng)篩過濾。收集濾液于離心管中,以1500r/min離心10min,。吸去上清液,,將細(xì)胞沉淀再用PBS漂洗2次。離心棄上清液,。收集未通過篩網(wǎng)的組織,,加消化液置37℃水浴條件下繼續(xù)消化15—30min,并過篩合并,。在漂洗后的細(xì)胞沉淀中加入一定量的培養(yǎng)液,,用吸管吹打數(shù)次,制成細(xì)胞懸液,;
5.吸取少量細(xì)胞懸液,,加入臺盼藍(lán)染液,在血細(xì)胞計數(shù)板上計數(shù),?;罴?xì)胞比例應(yīng)大于90%。用培養(yǎng)液稀釋細(xì)胞至密度為5×105—10×105個/ml,;
6.接種細(xì)胞懸液到培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,。于37℃、含5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
7.次日,,吸出培養(yǎng)液以去掉未貼壁的細(xì)胞,加入新鮮培養(yǎng)液,,以后每隔3—5天換液1次,;

會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗(yàn)證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏,!
標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功,!我們將在第一時間回復(fù)您~
撥打電話 產(chǎn)品分類
在線留言