PriCells: 正常小鼠腹股溝脂肪墊獲取脂肪源干細胞                                                                       PDF下載

實驗材料：
1. Hank’s緩沖鹽溶液（HBSS）,；
2. ASC培養(yǎng)基：含10%胎牛血清的DMEM,，添加1%的P/S；
3. 膠原酶溶液：100ml Hank’s緩沖鹽溶液中加入1g牛血清白蛋白和0.1gⅡ型膠原酶,；
4. 聚乙烯吡咯酮碘溶液,；
5. 陪替氏培養(yǎng)皿,，9cm；離心管,，50ml,；組織培養(yǎng)瓶，25cm²,；
6. 剪刀（2把）,，鑷子（2把）；
7. PBSA,；
8. 小鼠,，4—6只；
9. 麻醉劑：三溴乙醇,；

實驗方法：
1. 37℃水浴中預(yù)熱HBSS和脂肪源干細胞培養(yǎng)基,；
2. 麻醉動物后處死；
3. 轉(zhuǎn)移動物至層流凈化罩中,；
4. 70%酒精消毒腹部,；
5. 采用低位橫向切口打開腹腔；
6. 用鑷子取出性腺/附睪和腹股溝處的脂肪墊,；
7. 將脂肪組織置于培養(yǎng)皿中,，加入HBSS；
8. 待所有動物脂肪取出后,，將脂肪轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)皿中,；
9. 加入含有5%聚乙烯吡咯烷碘酮的HBSS 2—3min；
10. 漂洗組織并用HBSS洗滌脂肪,；
11. 用無菌鑷子將脂肪轉(zhuǎn)移至50ml離心管中,；
12. 用無菌剪刀將脂肪切碎；
13. 加入與組織體積相同的膠原酶溶液并混勻,；
14. 將離心管置于37℃水浴中60min,，其間不時混勻一下；
15. 離心,，50—100g,，5min；
16. 取出離心管,，用力搖晃（將基質(zhì)細胞與原代脂肪細胞*分離）,，再次離心5min；
17. 小心吸去上層油脂,，油脂層中含有原代脂肪細胞,，注意不要破壞位于下方的基質(zhì)—血管細胞層；
18. 加入5—10ml PBSA,，重懸沉淀,，再次離心5min,；
19. 洗滌三次，注意不要吸走基質(zhì)—血管細胞層,；
20. 最后一次洗滌后,，加入8ml ASC培養(yǎng)基重懸沉淀，轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶中,，置于37℃,，5%CO_²溫箱中；
21. 待細胞貼壁生長2—4天后換液,；
22. 換液時通過棄去培養(yǎng)基,，從而去除未貼壁的細胞；
23. 以后每周更換培養(yǎng)基2次,；