PriCells: FITC標記抗體-改良法
PriCells: FITC標記抗體-改良法
試劑:
1. 0.01mol/L pH7.2 PBS配方,。將NaCl 18g,、Na2HPO4 1.15g,、KH2PO4 0.2g,,
溶于2000ml三蒸水中,,調整pH至7.2,;
2. 0.5mol/L pH9.0碳酸鹽緩沖液配法。量取0.5mol/L Na2CO3(5.3%)10ml
加入0.5mol/L NaHCO3(4.2%)90ml中,,充分混合后,,調整pH至9.0;
3. 3%中碳酸鈉水溶液的配制,。稱取1.5g無水正碳酸鈉充分溶解于50ml三蒸
水中即成,;
方法與步驟:
1. 根據(jù)Marshall氏法高效價的抗人球蛋白兔免疫血清,分離球蛋白,;
2. 用0.15 mol/L NaCl的鹽水及0.15 mol/L pH9.0的NaHCO3-Na2CO3緩沖液稀釋使每毫升內含抗體10mg,,緩沖液為總量的10%;
3. 將以上溶液降溫至4℃,,按蛋白:熒光素=50—80mg:1mg的比例加入異硫氰酸熒光素,,在0—4℃下電磁攪拌12—14h;
4. 用半飽和硫酸銨將標記球蛋白沉淀分離,,除去未結合的熒光素,,再用緩沖鹽水透析,除去硫酸銨,,最后用Nessler氏試劑測驗至隔夜透析之鹽水無氨離子及熒光色素為止,;
5. 將制備好的熒光抗體加0.01%的疊氮鈉,分裝在1ml安培中,,或凍干,,或保存于4℃冰箱中可以用半年以上,,也可于-20℃冰箱保存達2年以上;