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PriCells: FITC標(biāo)記抗體-改良法
PriCells: FITC標(biāo)記抗體-改良法
試劑:
1. 0.01mol/L pH7.2 PBS配方。將NaCl 18g、Na2HPO4 1.15g、KH2PO4 0.2g,
溶于2000ml三蒸水中,,調(diào)整pH至7.2;
2. 0.5mol/L pH9.0碳酸鹽緩沖液配法,。量取0.5mol/L Na2CO3(5.3%)10ml
加入0.5mol/L NaHCO3(4.2%)90ml中,,充分混合后,調(diào)整pH至9.0,;
3. 3%中碳酸鈉水溶液的配制,。稱取1.5g無水正碳酸鈉充分溶解于50ml三蒸
水中即成;
方法與步驟:
1. 根據(jù)Marshall氏法高效價(jià)的抗人球蛋白兔免疫血清,,分離球蛋白,;
2. 用0.15 mol/L NaCl的鹽水及0.15 mol/L pH9.0的NaHCO3-Na2CO3緩沖液稀釋使每毫升內(nèi)含抗體10mg,緩沖液為總量的10%,;
3. 將以上溶液降溫至4℃,,按蛋白:熒光素=50—80mg:1mg的比例加入異硫氰酸熒光素,在0—4℃下電磁攪拌12—14h;
4. 用半飽和硫酸銨將標(biāo)記球蛋白沉淀分離,,除去未結(jié)合的熒光素,,再用緩沖鹽水透析,除去硫酸銨,,最后用Nessler氏試劑測(cè)驗(yàn)至隔夜透析之鹽水無氨離子及熒光色素為止,;
5. 將制備好的熒光抗體加0.01%的疊氮鈉,分裝在1ml安培中,,或凍干,,或保存于4℃冰箱中可以用半年以上,也可于-20℃冰箱保存達(dá)2年以上,;