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PriCells: 正常成熟破骨細(xì)胞原代培養(yǎng)
PriCells: 正常成熟破骨細(xì)胞原代培養(yǎng)
實驗材料：
1. 細(xì)胞來源：新生大鼠或兔,，妊娠6個月以內(nèi)的引產(chǎn)胎兒等,；
2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素,，pH7.2,；
3. 細(xì)胞支持物：薄骨片、蓋玻片,；
4. 培養(yǎng)液：199培養(yǎng)基,、MEM或DMEM培養(yǎng)基均可，須補(bǔ)加15%—20%小牛血清,、25mmol/L HEPES及青霉素100IU/ml,、鏈霉素100μg/ml；
實驗方法：
1. 薄骨片的制備：取新鮮牛股骨干的密質(zhì)部分,，沿骨縱軸用骨鋸切割成大小約0.5cm×0.5CM,、厚為0.1cm的小塊，再用金剛砂輪磨成厚約10—50μm（以便在相差顯微鏡下觀察）的薄骨片,。使用前用超聲波清洗儀超聲洗滌3次,，每次約10min。然后依次浸泡在3個盛有含青霉素（1000IU/ml）,、鏈霉素（1000μg/ml）,、兩性霉素B（3μg/ml）的抗生素溶液的小容器中，每次10—20min,。最后可浸于盛有含抗生素的培養(yǎng)液的容器內(nèi),，置4℃（短期）或-20℃（較長期）冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆茫?/div>
2. 取生后3—5d的大鼠，拉頸處死后置于盛有75%酒精的容器中,，消毒3—5min后,，取出放入培養(yǎng)皿中；
3. 用手術(shù)剪剪開其四肢皮膚,、肌肉,，取股骨和脛骨等長骨，放入盛緩沖液的培養(yǎng)皿中,。除去骨表面的軟組織,、骨膜以及軟骨；
4. 將除去骨膜等多余組織后的長骨干部分清洗后,，置于盛有少量培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿中,。用手術(shù)刀或手術(shù)剪縱行剖開骨干。用手術(shù)刀輕刮骨的內(nèi)表面,，同時用尖吸管不斷吸取培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)液,，沖洗骨內(nèi)表面多次,，直至骨內(nèi)表面變白為止,；
5. 用吸管吸打上述含碎骨片及分離細(xì)胞的培養(yǎng)液2—5min左右,，使附著于碎骨片上的破骨細(xì)胞分離脫落于培養(yǎng)液中。靜置1—2min后,，待碎骨片沉降,，收集細(xì)胞懸液；
6. 將細(xì)胞懸液加入到預(yù)置有薄骨片或蓋玻片的24孔培養(yǎng)板中,，在37℃,、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
7. 培養(yǎng)30min左右,，取出薄骨片或蓋玻片用培養(yǎng)液沖洗以除去未附著的骨髓造血細(xì)胞,。沖洗后，將薄骨片或蓋玻片移入另一培養(yǎng)板中繼續(xù)培養(yǎng),；
PriCells提供：
1. 各種原代細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基,；
2. 各種原代細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑；
3. 原代細(xì)胞分離試劑盒,；
4. 原代細(xì)胞鑒定試劑盒,；
5. 原代細(xì)胞總蛋白質(zhì)抽提物；
6. 原代細(xì)胞總RNA,；
7. 原代細(xì)胞總DNA,；
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