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PriCells: 正常人骨膜內(nèi)成骨細(xì)胞原代培養(yǎng)
PriCells: 正常人骨膜內(nèi)成骨細(xì)胞原代培養(yǎng)
實(shí)驗材料：
1. 骨組織來源：手術(shù)切除之骨組織,；
2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加100IU/ml青霉素,、100μg/ml鏈霉素，pH7.2,；
3. 消化液：0.25%胰蛋白酶溶液,，1mg/mlⅠ型膠原酶溶液；
4. 培養(yǎng)液：RPMI 1640培養(yǎng)基,，配制培養(yǎng)液時加入15%的小牛血清,，并用5.6% NaHCO3調(diào)節(jié)至pH 7.2；
實(shí)驗方法：
1. 取人手術(shù)切除之骨膜,，放入盛有緩沖液的培養(yǎng)皿中,，去除附于骨膜上的結(jié)締組織；
2. 將骨膜剪碎成1—2mm2大小的組織塊（膜片）,；
3. 加入0.1%EDTA與0.25%胰蛋白酶（1：1,，V/V）混合消化液，在37℃下消化20—30min,。以1000r/min離心1—2min,，沉淀骨膜組織塊，除去上清液,；
4. 用緩沖液洗沉淀骨膜組織塊2—3次，重復(fù)上述離心過程,；
5. 在37℃下再用1mg/mlⅠ型膠原酶消化骨膜組織塊約90min,。離心（1000r/min，5—10min）以沉淀細(xì)胞,，棄去消化液,。再用培養(yǎng)液洗1—2次，離心收集細(xì)胞,；
6. 加培養(yǎng)液于離心管中分散細(xì)胞,，調(diào)成細(xì)胞密度1×106—5×106個/ml的懸液,。將細(xì)胞懸液種植于培養(yǎng)瓶中。也可不使用消化酶而行植塊培養(yǎng)法種植培養(yǎng),，培養(yǎng)條件同前,；
7. 待細(xì)胞長滿培養(yǎng)瓶壁后進(jìn)行傳代培養(yǎng)；
PriCells提供：
1. 各種原代細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基,；
2. 各種原代細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑,；
3. 原代細(xì)胞分離試劑盒；
4. 原代細(xì)胞鑒定試劑盒,；
5. 原代細(xì)胞總蛋白質(zhì)抽提物,；
6. 原代細(xì)胞總RNA；
7. 原代細(xì)胞總DNA,；