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PriCells: 正常骨內(nèi)成骨細(xì)胞原代培養(yǎng)
PriCells: 正常骨內(nèi)成骨細(xì)胞原代培養(yǎng)
實(shí)驗(yàn)材料：
1. 骨組織來(lái)源：新生或胚胎大鼠,、兔,、人類(lèi)胚胎或手術(shù)切除之骨組織；
2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,，添加100IU/ml青霉素,、100μg/ml鏈霉素，pH7.2,；
3. 消化液：0.25%胰蛋白酶溶液,，1mg/mlⅡ型膠原酶溶液；
4. 培養(yǎng)液：RPMI 1640培養(yǎng)基,，配制培養(yǎng)液時(shí)加入15%的小牛血清,，并用5.6% NaHCO3調(diào)節(jié)至pH 7.2；
實(shí)驗(yàn)方法：
1. 取生后1—2d大鼠若干只,，拉頸處死后投入盛有75%乙醇的容器內(nèi)消毒3—5min,。取出置于消毒培養(yǎng)皿中；
2. 用手術(shù)剪剪開(kāi)頭頂部皮膚，取顱蓋骨（扁骨）,，放入盛有緩沖液的培養(yǎng)皿中,。去除骨膜及周?chē)Y(jié)締組織，再用緩沖液洗2次,；
3. 將洗好的顱蓋骨片置于含少量小牛血清的培養(yǎng)皿中剪碎成1mm×1mm大小的骨片植塊,；
4. 將骨片植塊直接接種于25ml螺旋口培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。也可在接種前,，先用1mg/mlⅡ型膠原酶溶液消化植塊15—20min,，經(jīng)緩沖液清洗2次以除去消化液，加少量小牛血清于培養(yǎng)皿內(nèi),，再將侵于小牛血清中的骨片植塊接種于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),。為了便于細(xì)胞鑒定，可在接種時(shí)將消毒蓋玻片條置于植塊周?chē)?/div>
5. 反轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶,，使種植有植塊的一面朝上,。加入3ml左右的培養(yǎng)液，蓋好螺旋蓋,，但不擰得過(guò)緊,，以利于與外界進(jìn)行氣體交換。將培養(yǎng)瓶置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
6. 2h后,，植塊黏附較為牢固,，此時(shí)輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，使組織塊浸沒(méi)于培養(yǎng)瓶中,，繼續(xù)培養(yǎng),。間隔3d換液一次；
PriCells提供：
1. 各種原代細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基,；
2. 各種原代細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑,；
3. 原代細(xì)胞分離試劑盒；
4. 原代細(xì)胞鑒定試劑盒,；
5. 原代細(xì)胞總蛋白質(zhì)抽提物,；
6. 原代細(xì)胞總RNA；
7. 原代細(xì)胞總DNA,；
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