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PriCells: 正常視網(wǎng)膜米勒細(xì)胞原代培養(yǎng)
PriCells: 正常視網(wǎng)膜米勒細(xì)胞原代培養(yǎng)
實(shí)驗(yàn)材料：
1. 材料來源：人眼,、兔眼或者豬眼等,；
2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,，添加100IU/ml青霉素,、100μg/ml鏈霉素,，pH7.2,；
3. 消化液：0.25%胰蛋白酶-100IU/ml透明質(zhì)酸酶混合消化液,；
4. 消毒無菌的手術(shù)器械若干；
實(shí)驗(yàn)方法：
1. 取材
（1）取自人的供體眼球,；
1） 經(jīng)常規(guī)消毒程序消毒后,，于鋸齒緣后約1mm處環(huán)形切開眼球，去除前段及玻璃體,；
2） 用無齒小鑷子輕輕剝?nèi)∫暰W(wǎng)膜組織,，并用眼科小剪子剪去視乳頭周圍的視網(wǎng)膜及血管；
3） 用PBS液稍洗,，去除黏附的色素上皮細(xì)胞,。置于盛有平衡鹽溶液的培養(yǎng)皿中；
（2）取自兔的供體眼球：當(dāng)取出視網(wǎng)膜組織后,，在解剖顯微鏡下用眼科小剪刀剪去髓放線部分及血管,；
2. 原代培養(yǎng),；
1） 在處理完畢的視網(wǎng)膜組織中加入胰蛋白酶和透明質(zhì)酸酶混合消化液，于37℃調(diào)間隙消化30min,；
2） 用有血清培養(yǎng)液終止消化,。經(jīng)吹打后，將細(xì)胞懸液離心（800r/min）5min,；
3） 用培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,，并吸走絮狀的纖維樣物質(zhì)；
4） 按4×104～6×104個(gè)細(xì)胞/ml的密度進(jìn)行接種,；
5） 以常規(guī)方法培養(yǎng),。24h后取出培養(yǎng)瓶，置換培養(yǎng)液,，以去除沒有貼壁的其它細(xì)胞,；
6） 每周換液2次，在細(xì)胞分裂增長至基本融合成單層時(shí)傳代,；
PriCells提供：
1. 各種原代細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基,；
2. 各種原代細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑；
3. 原代細(xì)胞分離試劑盒,；
4. 原代細(xì)胞鑒定試劑盒,；
5. 原代細(xì)胞總蛋白質(zhì)抽提物；
6. 原代細(xì)胞總RNA,；
7. 原代細(xì)胞總DNA,；