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PriCells: 正常大兔腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)
PriCells: 正常大兔腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)
實(shí)驗(yàn)材料：
1. 正常兔大腦皮質(zhì)組織,；
2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L青霉素,、200mg/L鏈霉素,，pH7.2；
3. M199培養(yǎng)液（含20%小牛血清,、肝素25U/ml,、HEPES 10mmol/L、100IU/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素）,；D-Hanks液,；0.05%胰蛋白酶溶液；0.05%膠原酶溶液,；15%右旋糖苷（用Hanks配制,，pH7.4）；
4. 勻漿器,、手術(shù)刀,、解剖剪、解剖鑷,、眼科剪,，眼科鑷，止血鉗,，無菌消毒手術(shù)器械,；
5. 離心管（15ml、50ml）
6. 網(wǎng)篩：110μm尼龍網(wǎng)篩
實(shí)驗(yàn)方法：
1. 通過頸動(dòng)脈放血將兔處si,，去頭皮,。將頭顱取出并浸入75%的乙醇中,，消毒約1min。在無菌狀態(tài)下迅速取出兔大腦皮質(zhì),。需小心剔除大血管和軟腦膜,；
2. 將腦皮質(zhì)放入D-Hanks液中，漂洗數(shù)次后,，將其剪碎,。再移入含0.05%胰蛋白酶溶液的小瓶內(nèi)，在37℃水浴中消化10—20min,；
3. 用有血清培養(yǎng)液中止消化,。置于玻璃研磨器內(nèi)研磨，制成粗懸液,。經(jīng)孔徑為110μm尼龍篩網(wǎng)過濾,，將濾液以4000r/min離心10min；
4. 棄離心后的上清液,。給沉淀加入15%右旋糖苷溶液,，重新懸浮沉淀。然后,，再以4000r/min離心20min,。收集微血管片段；
5. 用0.05%膠原酶溶液消化2—4h,。用Hanks液洗滌并離心,，給微血管片段加入M199培養(yǎng)液；
6. 接種到培養(yǎng)瓶中,，置37℃,、5%CO2的培養(yǎng)箱中（濕度100%）培養(yǎng)
7. 24h后換液，將未貼壁的微血管段移入其它培養(yǎng)瓶或皿中繼續(xù)貼壁生長,。之后,，每3d換液一次，待細(xì)胞長至融合狀態(tài)時(shí),，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),；
PriCells提供：
1. 各種原代細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基；
2. 各種原代細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑,；
3. 原代細(xì)胞分離試劑盒,；
4. 原代細(xì)胞鑒定試劑盒；
5. 各種原代細(xì)胞DNA,；
6. 各種原代細(xì)胞RNA；
7. 各種原代細(xì)胞蛋白質(zhì),；