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PriCells: 正常大鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)
PriCells: 正常大鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)
實驗材料：
1. 大鼠主動脈血管,；
2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L青霉素,、200mg/L鏈霉素，pH7.2；
3. 培養(yǎng)用液：M199培養(yǎng)液或RPMI1640培養(yǎng)液（含20%小牛血清,，pH7.2）,；0.125%胰蛋白酶-0.01%EDTA（1:1，V：V）混合消化液,；D-Hanks液,、100IU/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素；1%明膠溶液,；
4. 培養(yǎng)器具：培養(yǎng)瓶或皿,、白內(nèi)障、眼科剪,、鑷子等,；
培養(yǎng)方法：
1． 將大鼠頸椎脫臼或頸動脈放血處死后，將整個大鼠泡于75%乙醇中消毒1min,。在無菌狀態(tài)下,，逐層剪開胸腔，分離取出主動脈,，放含無菌D-Hanks液培養(yǎng)皿中,；
2． 用眼科剪、鑷盡量去除血管外膜的脂肪和纖維組織,。然后,，用含抗生素的D-Hanks液沖洗血管的外表面及血管腔內(nèi)的凝血數(shù)次，再放入另一無菌培養(yǎng)皿中,；
3． 用眼科剪縱向剪開血管,，平展在培養(yǎng)皿中。用非常銳利的手術(shù)刀將其切成1.5mm×1.5mm大小的動脈植塊,，然后種植到培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中（培養(yǎng)瓶或皿用1%明膠預(yù)置4℃下過夜,，使用前2h移入37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中。用時可以先經(jīng)含20%小牛血清的M199或RPMI1640培養(yǎng)液沖洗）,。將動脈植塊的內(nèi)膜面與瓶底（或皿底）接觸,，種植密度約為1塊/cm2；
4． 置37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中（濕度100%）靜置2h（干貼壁）,。培養(yǎng)瓶皿若不用明膠包被則為0.5—1h,。然后，加入少許含20%小牛血清的M199培養(yǎng)液或RPMI1640培養(yǎng)液（pH7.2）,，液量以略蓋過動脈植塊內(nèi)膜面,，而又不使植塊漂浮為宜；
5． 72h后,，當(dāng)細(xì)胞達(dá)一定密度時,，將動脈植塊除去。換培養(yǎng)液1次,。以后每2d換液1次,，每次換1/2—2/3的液量,。繼續(xù)培養(yǎng)8—10d，細(xì)胞融合成單層,，即可傳代,；
PriCells提供：
1. 各種原代細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基；
2. 各種原代細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑,；
3. 原代細(xì)胞分離試劑盒,；
4. 原代細(xì)胞鑒定試劑盒；
5. 各種原代細(xì)胞DNA,；
6. 各種原代細(xì)胞RNA,；
7. 各種原代細(xì)胞蛋白質(zhì)；