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PriCells: 正常大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)
PriCells: 正常大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)
實(shí)驗(yàn)材料：
1. 大鼠主動(dòng)脈血管；
2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,，添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素,，pH7.2,；
3. 培養(yǎng)用液：M199培養(yǎng)液或RPMI1640培養(yǎng)液（含20%小牛血清，pH7.2）；0.125%胰蛋白酶-0.01%EDTA（1:1,，V：V）混合消化液,；D-Hanks液、100IU/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素,；1%明膠溶液,；
4. 培養(yǎng)器具：培養(yǎng)瓶或皿、白內(nèi)障,、眼科剪,、鑷子等；
培養(yǎng)方法：
1． 將大鼠頸椎脫臼或頸動(dòng)脈放血處死后,，將整個(gè)大鼠泡于75%乙醇中消毒1min,。在無菌狀態(tài)下，逐層剪開胸腔,，分離取出主動(dòng)脈,，放含無菌D-Hanks液培養(yǎng)皿中；
2． 用眼科剪,、鑷盡量去除血管外膜的脂肪和纖維組織,。然后，用含抗生素的D-Hanks液沖洗血管的外表面及血管腔內(nèi)的凝血數(shù)次,，再放入另一無菌培養(yǎng)皿中,；
3． 用眼科剪縱向剪開血管，平展在培養(yǎng)皿中,。用非常銳利的手術(shù)刀將其切成1.5mm×1.5mm大小的動(dòng)脈植塊,，然后種植到培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中（培養(yǎng)瓶或皿用1%明膠預(yù)置4℃下過夜，使用前2h移入37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中,。用時(shí)可以先經(jīng)含20%小牛血清的M199或RPMI1640培養(yǎng)液沖洗）,。將動(dòng)脈植塊的內(nèi)膜面與瓶底（或皿底）接觸，種植密度約為1塊/cm2,；
4． 置37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中（濕度100%）靜置2h（干貼壁）,。培養(yǎng)瓶皿若不用明膠包被則為0.5—1h。然后,，加入少許含20%小牛血清的M199培養(yǎng)液或RPMI1640培養(yǎng)液（pH7.2）,，液量以略蓋過動(dòng)脈植塊內(nèi)膜面，而又不使植塊漂浮為宜,；
5． 72h后,，當(dāng)細(xì)胞達(dá)一定密度時(shí)，將動(dòng)脈植塊除去,。換培養(yǎng)液1次,。以后每2d換液1次，每次換1/2—2/3的液量。繼續(xù)培養(yǎng)8—10d,，細(xì)胞融合成單層,，即可傳代；
PriCells提供：
1. 各種原代細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基,；
2. 各種原代細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑,；
3. 原代細(xì)胞分離試劑盒；
4. 原代細(xì)胞鑒定試劑盒,；
5. 各種原代細(xì)胞DNA,；
6. 各種原代細(xì)胞RNA；
7. 各種原代細(xì)胞蛋白質(zhì),；