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PriCells: 正常動物胸腺上皮細胞的培養(yǎng)
PriCells: 正常動物胸腺上皮細胞的培養(yǎng)
實驗材料：
1. 胸腺上皮細胞來源；一般取材小鼠或手術切取的兒童之胸腺,；
2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L青霉素,、200mg/L鏈霉素,，pH7.2；
3. 有血清培養(yǎng)液：可使用RPMI1640培養(yǎng)液,，添加10%胎牛血清,、谷氨酰胺2mmol/L、丙酮酸鈉1mmol/L,、非必需氨基酸1mmol/L,、2-巰基yi醇（2-ME）5×10-5mol/L,、青霉素100IU/ml,、鏈霉素100μg/ml（Schreiber et al.1991）。也可以DMEM作為基礎培養(yǎng)基,；
4. 化學限定性培養(yǎng)液：基礎培養(yǎng)液為DMEM,，添加HDL100μg/ml、轉鐵蛋白50μg/ml,、胰島素5μg/ml,、氫化可de松2.7×10-7mol/L、EGF 10ng/ml,、硒25 ng/ml以及三碘甲腺原氨酸（T3）1×10-10mol/L（Schreiber et al.1991）,；
5. 消化液：原代培養(yǎng)時，從胸腺組織制備細胞懸液時,，所用的消化液為1mg/ml的膠原酶,，用含有15%胎牛血清的DMEM配制。傳代時所用的消化液為0.02%EDTA-0.25%胰蛋白酶混合液,；6. 手術刀,、解剖剪、解剖鑷,、眼科剪,，眼科鑷，止血鉗,，無菌消毒手術器械,；
7. 離心管（15ml,、50ml）
實驗方法：
1. 若取材于小鼠，先將動物處死,，用75%乙醇消毒,。打開胸腔，取出胸腺,。如果取材于手術切除的兒童胸腺,，將所取胸腺組織置于含抗生素的平衡鹽溶液中,；
2. 將切取的胸腺組織盡可能去除表面的結締組織被膜,。將胸腺實質(zhì)剪成約1mm3大小的植塊,；
3. 用平衡鹽溶液反復洗滌植塊，以盡量洗去胸腺細胞,；
4. 在37℃,、5%CO2的培養(yǎng)箱中，用膠原酶消化液消化約1.5h,；
5. 在膠原酶消化液中,，將組織塊進一步剪碎；
6. 靜置,，待組織塊下沉，棄去上清液,。將組織塊重新懸浮于無血清培養(yǎng)液中,；
7. 重復步驟5可達3次；
8. 將將植塊接種于培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi),，置37℃,、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)器皿可以用生長基質(zhì)物質(zhì)預先包被,。在原代培養(yǎng)最初6d內(nèi),，不更換培養(yǎng)液；
注意事項：
胸腺上皮細胞體外培養(yǎng)最大的問題是成纖維細胞的過度生長,，故抑制成纖維細胞的生長是上皮細胞培養(yǎng)的成功的關鍵,。
PriCells提供：
1. 各種原代細胞特制基礎培養(yǎng)基；
2. 各種原代細胞培養(yǎng)特制添加劑,；
3. 原代細胞分離試劑盒,；
4. 原代細胞鑒定試劑盒；
5. 各種原代細胞DNA,；
6. 各種原代細胞RNA,；
7. 各種原代細胞蛋白質(zhì)；