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PriCells: 正常動物胸腺上皮細胞的培養(yǎng)

時間:2021-10-9 閱讀:230
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PriCells: 正常動物胸腺上皮細胞的培養(yǎng)
 
實驗材料:
1. 胸腺上皮細胞來源;一般取材小鼠或手術(shù)切取的兒童之胸腺,;
2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,,添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素,,pH7.2,;
3. 有血清培養(yǎng)液:可使用RPMI1640培養(yǎng)液,添加10%胎牛血清,、谷氨酰胺2mmol/L,、丙酮酸鈉1mmol/L、非必需氨基酸1mmol/L,、2-巰基yi醇(2-ME)5×10-5mol/L,、青霉素100IU/ml、鏈霉素100μg/ml(Schreiber et al.1991),。也可以DMEM作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,;
4. 化學(xué)限定性培養(yǎng)液:基礎(chǔ)培養(yǎng)液為DMEM,添加HDL100μg/ml,、轉(zhuǎn)鐵蛋白50μg/ml,、胰島素5μg/ml、氫化可de松2.7×10-7mol/L,、EGF 10ng/ml,、硒25 ng/ml以及三碘甲腺原氨酸(T3)1×10-10mol/L(Schreiber et al.1991);
5. 消化液:原代培養(yǎng)時,,從胸腺組織制備細胞懸液時,,所用的消化液為1mg/ml的膠原酶,用含有15%胎牛血清的DMEM配制,。傳代時所用的消化液為0.02%EDTA-0.25%胰蛋白酶混合液,;6. 手術(shù)刀、解剖剪,、解剖鑷,、眼科剪,,眼科鑷,止血鉗,,無菌消毒手術(shù)器械,;
7. 離心管(15ml、50ml)
 
實驗方法:
1. 若取材于小鼠,,先將動物處死,,用75%乙醇消毒。打開胸腔,,取出胸腺,。如果取材于手術(shù)切除的兒童胸腺,將所取胸腺組織置于含抗生素的平衡鹽溶液中,;
2. 將切取的胸腺組織盡可能去除表面的結(jié)締組織被膜。將胸腺實質(zhì)剪成約1mm3大小的植塊,;
3. 用平衡鹽溶液反復(fù)洗滌植塊,,以盡量洗去胸腺細胞;
4. 在37℃,、5%CO2的培養(yǎng)箱中,,用膠原酶消化液消化約1.5h;
5. 在膠原酶消化液中,,將組織塊進一步剪碎,;
6. 靜置,待組織塊下沉,,棄去上清液,。將組織塊重新懸浮于無血清培養(yǎng)液中;
7. 重復(fù)步驟5可達3次,;
8. 將將植塊接種于培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi),,置37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。培養(yǎng)器皿可以用生長基質(zhì)物質(zhì)預(yù)先包被,。在原代培養(yǎng)最初6d內(nèi),不更換培養(yǎng)液,;
 
注意事項:
胸腺上皮細胞體外培養(yǎng)最大的問題是成纖維細胞的過度生長,,故抑制成纖維細胞的生長是上皮細胞培養(yǎng)的成功的關(guān)鍵。
 
PriCells提供:
1. 各種原代細胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基,;
2. 各種原代細胞培養(yǎng)特制添加劑,;
3. 原代細胞分離試劑盒;
4. 原代細胞鑒定試劑盒,;
5. 各種原代細胞DNA,;
6. 各種原代細胞RNA,;
7. 各種原代細胞蛋白質(zhì);

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