PriCells: 正常人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng) 實(shí)驗(yàn)材料：

1. 手術(shù)切除的正常肺組織

2. 胰蛋白酶/EDTA液：0.05%胰蛋白酶,，0.5mmol/L EDTA

3. 6孔培養(yǎng)板：用多聚賴氨酸包被

4. 不含Ca²⁺和Mg²⁺的1×PBS（pH=7.4）,，添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素和200000U/L慶大霉素,，pH7.4

5. 手術(shù)刀,、解剖剪,、解剖鑷,、眼科剪,，眼科鑷

6. 離心管（15ml、50ml）  

實(shí)驗(yàn)方法：

1． 將肺組織至于無(wú)菌的培養(yǎng)皿中用含雙抗的1×PBS（pH=7.4）清洗若干次至無(wú)明顯血細(xì)胞,；

2． 剪取肺組織邊緣微血管豐富的組織,，用含雙抗的1×PBS（pH=7.4）清洗兩次；

3． 將剪取的肺邊緣組織剪成2-3mm³大小,，加入含雙抗的1×PBS（pH=7.4）清洗,；

4． 用進(jìn)行過(guò)滅菌處理的玻璃滴管將剪碎的組織塊和清洗用的1×PBS（pH=7.4）一起轉(zhuǎn)入15ml離心管中；

5． 250rpm/min離心2 min,，小心傾去液體,，再加入適量的含雙抗的1×PBS（pH=7.4），用玻璃滴管吹吸液體以清洗組織塊,；

6． 繼續(xù)250rpm/min離心2 min,，小心傾去液體，重復(fù)上述步驟若干次,，直至離心后的液體中觀察不到明顯的紅色；

7． 將清洗好的組織塊重新轉(zhuǎn)至無(wú)菌的培養(yǎng)皿中,，用無(wú)菌的200 ml的吸頭將組織塊貼于25cm²培養(yǎng)瓶中,；

8． 加入2ml培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶倒置放于37℃,、5%CO₂的培養(yǎng)箱中2-3h之后正置培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng),；

9． 培養(yǎng)若干天后，可觀察到組織塊周圍陸續(xù)有細(xì)胞爬出,，繼續(xù)培養(yǎng)幾天,，直至組織塊周圍的細(xì)胞達(dá)到較高密度（培養(yǎng)其間兩天換液一次，換液操作時(shí)動(dòng)作一定要輕柔,，以防組織塊被搖下）,；

10. 當(dāng)組織塊附近的細(xì)胞生長(zhǎng)到較高密度后，將貼壁的組織塊吹下,，換新的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24,；

11. 24h后，用0.25%的Trypsin-EDTA消化細(xì)胞,，F(xiàn)BS中止消化,，將消化后的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入15ml離心管，1000rpm/min離心5min,，之后傾去廢液,，用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,，轉(zhuǎn)入原來(lái)的培養(yǎng)瓶中，繼續(xù)在37℃,、5%CO₂的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。  

PriCells提供：

1. 各種原代細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基；

2. 各種原代細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑,；

3. 原代細(xì)胞分離試劑盒,；

4. 原代細(xì)胞鑒定試劑盒；

5. 各種原代細(xì)胞DNA,；

6. 各種原代細(xì)胞RNA,；

7. 各種原代細(xì)胞蛋白質(zhì)；