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PriCells: 正常人支氣管上皮細(xì)胞培養(yǎng)
PriCells: 正常人支氣管上皮細(xì)胞培養(yǎng)
實(shí)驗(yàn)材料：
1. 手術(shù)切除的含支氣管的正常肺組織
2. 胰蛋白酶/EDTA液：0.05%胰蛋白酶,，0.5mmol/L EDTA
3. 6孔培養(yǎng)板：用多聚賴氨酸包被
4. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS（pH=7.2），添加200000IU/L青霉素,、200mg/L鏈霉素和200000U/L慶大霉素,，pH7.4
5. 手術(shù)刀、解剖剪,、解剖鑷,、眼科剪，眼科鑷
6. 離心管（15ml,、50ml）
實(shí)驗(yàn)方法：
1. 將分離的兩片肺葉組織用含雙抗的1×PBS（pH=7.2）反復(fù)清洗幾次,；
2. 小心的用眼科剪將肺葉中的白色支氣管組織剪下；
3. 再用含雙抗的1×PBS（pH=7.2）反復(fù)沖洗若干次,；
4. 將取下的支氣管組織剪成1mm3左右大小的組織塊,；
5. 用含雙抗的1×PBS（pH=7.2）反復(fù)清洗，直至清洗液清亮為止,；
6. 將組織塊轉(zhuǎn)入15ml離心管中，200rpm/min離心2min ,，離心后傾去1×PBS（pH=7.2）；
7. 加入組織塊4-5倍體積的胰酶,，37℃水浴中消化30min,，不時(shí)震蕩,；
8. 消化完成后,，200rpm/min離心2min,，小心傾去消化液,，再加入組織塊4-5倍體積膠原酶Ⅱ，37℃水浴中消化1h，不時(shí)震蕩；
9. 消化完成后震蕩離心管3次，之后靜置5min,，待較大的組織塊沉降至管底后,，小心吸出上層懸液（如吸出的懸液中絮狀或塊狀的組織較多,，可考慮過200目網(wǎng)篩去除），轉(zhuǎn)入另一離心管中,；
10. 1000rpm/min離心5min,，傾去上層液體，加入培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,，轉(zhuǎn)入6孔板中,，置于37℃,、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。
PriCells提供：
1. 各種原代細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基；
2. 各種原代細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑,；
3. 原代細(xì)胞分離試劑盒,；
4. 原代細(xì)胞鑒定試劑盒,；
5. 各種原代細(xì)胞DNA；
6. 各種原代細(xì)胞RNA,；
7. 各種原代細(xì)胞蛋白質(zhì),；