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PriCells: 動(dòng)物小血管內(nèi)皮細(xì)胞的分離
PriCells: 動(dòng)物小血管內(nèi)皮細(xì)胞的分離
實(shí)驗(yàn)材料:
1. 兔,、狗或大鼠等動(dòng)物
2. 1×PBS,,含青霉素100u/ml和鏈霉素100μg/ml,pH7.4
3. 0.2%Ⅰ型膠原酶
4. 眼科剪,,眼科鑷
5. 慕絲線(7號(hào)線),、細(xì)鐵絲
6. 離心管(15ml、50ml)
實(shí)驗(yàn)方法:
1. 處死動(dòng)物后,,局部消毒取出主動(dòng)脈,,用加入抗菌素的PBS沖洗,放入盛有PBS的平皿中,,摘除血管外的脂肪和結(jié)締組織,。
2. 用細(xì)絲線結(jié)扎血管的一端,用鑷子輕輕夾住結(jié)扎側(cè)的末端,,用一鐵絲將扎住的末端捅進(jìn)血管內(nèi),,將血管翻轉(zhuǎn)過(guò)來(lái),使內(nèi)皮細(xì)胞面向外,。血管另一側(cè)的末端也塞進(jìn)血管內(nèi),,用細(xì)絲線結(jié)扎住,使整個(gè)血管僅內(nèi)皮細(xì)胞暴露在外面,。
3. 把血管放至盛有5mol 0.2%膠原酶的平皿中,,置于37℃ CO2孵箱中消化10-15min,多次搖動(dòng)平皿,,以便內(nèi)皮細(xì)胞脫落,。消化近結(jié)束時(shí),在倒置顯微鏡下觀察,,若大部分內(nèi)皮細(xì)胞已脫落,,加少量培養(yǎng)液終止消化。
4. 將消化液收集到離心管中,,1000r/min離心5min,。加入培養(yǎng)基重懸制成細(xì)胞懸液,放入T25的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中,置于37℃,,含5%CO2的孵箱中培養(yǎng),。2天換液1次。
5. PriCells-原代內(nèi)皮細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基
6. PriCells-原代內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑
7. PriCells-原代細(xì)胞分離試劑盒
8. PriCells-原代細(xì)胞鑒定試劑盒