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武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司

PriCells: 人或動(dòng)物腦毛細(xì)血管原代內(nèi)皮細(xì)胞的分離

時(shí)間:2021-9-24 閱讀:326
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PriCells: 人或動(dòng)物腦毛細(xì)血管原代內(nèi)皮細(xì)胞的分離
 
實(shí)驗(yàn)材料:
1.     人或動(dòng)物的腦部毛細(xì)血管
2.     PBS,含青霉素100U/ml和鏈霉素100μg/ml
3.     10μg/ml DNaseⅠ和1mg/ml膠原酶
4.     250g/L BSA
5.     眼科剪,,眼科鑷
6.     60μm尼龍篩,、150μm尼龍篩和230μm尼龍篩
7.     離心管(15ml、50ml)
 
實(shí)驗(yàn)方法:
1.     麻醉動(dòng)物后取其腦組織,,將腦組織放入盛有PBS的容器內(nèi),,去除腦膜和表面血管,取皮質(zhì)灰質(zhì),,用勻漿機(jī)將其制成勻漿,。
2.     用10μg/ml DNaseⅠ和1mg/ml膠原酶溶液,37℃,,消化腦組織1h,。吸去上清,將沉淀懸浮于250g/L BSA的PBS中,,4000r/min離心10min,,去除懸浮的脂肪細(xì)胞碎片和髓磷脂。
3.     將沉淀物重新懸浮于上述消化液中,,37℃消化1-3h,。消化產(chǎn)物先過230μm尼龍篩,,再過150μm尼龍篩,以去除大血管,、細(xì)胞碎片等,。
4.     收集微血管。將濾過液通過60μm尼龍篩,,以便收集微血管內(nèi)皮細(xì)胞,。將篩子倒轉(zhuǎn),用培養(yǎng)液將微血管內(nèi)皮細(xì)胞沖洗至平皿中,。
5.     PriCells-原代內(nèi)皮細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基
6.     PriCells-原代內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑
7.     PriCells-原代細(xì)胞分離試劑盒


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