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武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司

PriCells: 人或動物腦毛細血管原代內皮細胞的分離

時間:2021-9-24 閱讀:328
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PriCells: 人或動物腦毛細血管原代內皮細胞的分離
 
實驗材料:
1.     人或動物的腦部毛細血管
2.     PBS,,含青霉素100U/ml和鏈霉素100μg/ml
3.     10μg/ml DNaseⅠ和1mg/ml膠原酶
4.     250g/L BSA
5.     眼科剪,,眼科鑷
6.     60μm尼龍篩,、150μm尼龍篩和230μm尼龍篩
7.     離心管(15ml,、50ml)
 
實驗方法:
1.     麻醉動物后取其腦組織,,將腦組織放入盛有PBS的容器內,,去除腦膜和表面血管,取皮質灰質,,用勻漿機將其制成勻漿,。
2.     用10μg/ml DNaseⅠ和1mg/ml膠原酶溶液,37℃,,消化腦組織1h,。吸去上清,將沉淀懸浮于250g/L BSA的PBS中,,4000r/min離心10min,,去除懸浮的脂肪細胞碎片和髓磷脂。
3.     將沉淀物重新懸浮于上述消化液中,,37℃消化1-3h,。消化產物先過230μm尼龍篩,再過150μm尼龍篩,,以去除大血管,、細胞碎片等。
4.     收集微血管,。將濾過液通過60μm尼龍篩,以便收集微血管內皮細胞,。將篩子倒轉,,用培養(yǎng)液將微血管內皮細胞沖洗至平皿中。
5.     PriCells-原代內皮細胞特制基礎培養(yǎng)基
6.     PriCells-原代內皮細胞培養(yǎng)特制添加劑
7.     PriCells-原代細胞分離試劑盒


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