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武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司

PriCells: 人或動(dòng)物肺毛細(xì)血管原代內(nèi)皮細(xì)胞的分離

時(shí)間:2021-9-24 閱讀:376
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PriCells: 人或動(dòng)物肺毛細(xì)血管原代內(nèi)皮細(xì)胞的分離
 
實(shí)驗(yàn)材料:
1.     人或動(dòng)物的肺部毛細(xì)血管
2.     PBS,,含青霉素100U/ml和鏈霉素100μg/ml
3.     3mg/ml中性蛋白酶、0.25%胰蛋白酶
4.     眼科剪,,眼科鑷
5.     20μm尼龍篩,、100μm尼龍篩
6.     離心管(15ml、50ml)
 
實(shí)驗(yàn)方法:
1.     將動(dòng)物麻醉后開胸取肺組織,,將肺組織切成1cm3的小塊,,用PBS沖洗干凈。剪去胸膜,,剔除大血管,。
2.     用勻漿機(jī)制備肺組織勻漿,然后放在20μm尼龍篩上沖洗,,以去掉紅細(xì)胞和組織碎片,。
3.     消化肺組織:將留在篩子上的組織懸浮于3mg/ml中性蛋白酶的培養(yǎng)液中,在37℃恒溫振蕩器中孵育16h,。將消化液裝入離心管中離心(2000r/min,,10min),沉淀物懸浮于含1mmol/L EDTA的0.25%胰蛋白酶液中,,37℃孵育15min,。
4.     加入*培養(yǎng)液終止胰蛋白酶消化,通過100μm尼龍篩,,以去除結(jié)締組織碎片,。將濾過液以2000r/min離心10min,并懸浮于培養(yǎng)液中,,可進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),。
5.     PriCells-原代內(nèi)皮細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基
6.     PriCells-原代內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑
7.     PriCells-原代細(xì)胞分離試劑盒


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