PriCells: 動物淋巴管內皮細胞的分離

基本方案2：

植塊培養(yǎng)法

實驗材料：

1. 哺乳動物胸導管或腸系膜淋巴管

2. 1%明膠鋪底,，置超凈臺晾干

3. 1×PBS,，含青霉素100u/ml和鏈霉素100μg/ml,，pH7.4

4. 眼科剪,，眼科鑷

5. 慕絲線（7號線）、細鐵絲

6. 離心管（15ml,、50ml）

實驗方法：

1. 處死動物后,，打開胸腔，分離胸導管,，在胸導管上端結扎,，切取10-15cm的一段。將胸導管放入預冷PBS中漂洗,。

2. 在解剖顯微鏡下,，用眼科剪和眼科鑷剝除外膜的脂肪和纖維組織，然后用PBS反復沖洗3次,。用虹膜剪縱向切開管腔,，再用PBS沖洗管腔面。然后,，將管腔剪成約1mm3的小塊,。

3. 將組織快放入培養(yǎng)皿中，使內膜面朝下,，放入37℃,，含5%CO2的孵箱中培養(yǎng)4h,。加入培養(yǎng)液，胸導管組織塊能否貼壁是內皮細胞培養(yǎng)的關鍵,。因此,，加入培養(yǎng)液時操作要輕，以免使組織塊浮起,。

4. 靜置培養(yǎng)3d后換液,，以后每隔2-3d換液1次。培養(yǎng)4-6d后,，內皮細胞開始自植塊長出,，細胞呈長梭形或多邊形。2-3周后,，細胞生長形成單層,。待細胞生長形成單層時，可傳代培養(yǎng),。

5. PriCells-原代內皮細胞特制基礎培養(yǎng)基

6. PriCells-原代內皮細胞培養(yǎng)特制添加劑

7. PriCells-原代細胞分離試劑盒

8. PriCells-原代細胞鑒定試劑盒