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PriCells: ?;蜇i大血管原代內(nèi)皮細(xì)胞的分離-消化刮脫法
PriCells: ?;蜇i大血管原代內(nèi)皮細(xì)胞的分離-消化刮脫法
實(shí)驗(yàn)材料:
1. 牛或豬
2. PBS,,含青霉素100U/ml和鏈霉素100μg/ml
3. 0.1%Ⅰ型膠原酶
4. 眼科剪,,眼科鑷
5. 慕絲線
6. 離心管(15ml、50ml)
實(shí)驗(yàn)方法:
1. 分離?;蜇i的主動(dòng)脈等大血管,,長(zhǎng)15-20cm,,用絲線結(jié)扎血管各分支后,取出主動(dòng)脈,。放入盛有含青霉素100U/ml和鏈霉素100μg/ml的PBS平皿中,,縱向切開血管壁,內(nèi)皮朝上,,用PBS沖洗3次,。
2. 在另一平皿中加入少量0.1%Ⅰ型膠原酶溶液。37℃下消化5-10min,,然后加入培養(yǎng)液終止消化,。
3. 刮取內(nèi)皮細(xì)胞。用刮刀輕輕刮內(nèi)膜表面,,刮刀與血管表面成60°,刮刀要輕而均勻地推進(jìn),。不可刮得過深,,也不要刮到血管的邊緣處,以免成纖維細(xì)胞被污染,。
4. 將刮下的內(nèi)皮細(xì)胞懸液浮于培養(yǎng)液中,,1000r/min,離心10min,。吸去上清,;再加入15ml培養(yǎng)液,用滴灌輕輕吹打,,以便分散細(xì)胞團(tuán),,再離心1次,并吸去上清,。加入5ml培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞,,制備細(xì)胞懸液。
5. PriCells-原代內(nèi)皮細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基
6. PriCells-原代內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑
7. PriCells-原代細(xì)胞分離試劑盒