細(xì) 胞 基 本 信 息
▲LNCaP clone FGC細(xì)胞正常生長(zhǎng)形態(tài)照片
--細(xì) 胞 基 本 信 息---
細(xì)胞名稱(chēng)： LNCaP clone FGC(人前列腺癌細(xì)胞)
細(xì)胞別稱(chēng)： LNCaP-Clone-FGC; LNCaP.FGC; LNCaP-FGC; LNCaP FGC; LNCaP-ATCC
細(xì)胞貨號(hào)： SNL-356
生長(zhǎng)特性： 貼壁
培養(yǎng)條件： 1640+10% FBS+1% P/S
培養(yǎng)環(huán)境： 空氣,，95%；二氧化碳 (CO2),，5%
細(xì)胞簡(jiǎn)介： 人前列腺癌細(xì)胞LNCaP clone FGC是從一位50歲白人男性(血型B+)的左鎖骨淋巴結(jié)針刺活檢中分離,，該患者經(jīng)確診為前列腺癌轉(zhuǎn)移。LNCaP clone FGC細(xì)胞對(duì)5-α-二氫睪酮(生長(zhǎng)調(diào)節(jié)子和酸性磷酸脂酶產(chǎn)物)有響應(yīng),。LNCaP clone FGC細(xì)胞并不形成一致的單層,，而是形成集落，在傳代時(shí)可以反復(fù)吹吸分散,。LNCaP clone FGC細(xì)胞僅僅輕輕地吸附在基底上,，不形成匯合，很快使培養(yǎng)基變酸,。LNCaP clone FGC細(xì)胞生長(zhǎng)極其緩慢,，傳代后48小時(shí)內(nèi)不應(yīng)擾動(dòng)。當(dāng)培養(yǎng)瓶包裝運(yùn)輸后,，多數(shù)LNCaP clone FGC細(xì)胞從培養(yǎng)瓶底分離,，懸浮在培養(yǎng)基中。
細(xì) 胞 特 點(diǎn)
LNCaP clone FGC(前列腺癌細(xì)胞)特點(diǎn) ：
1,、細(xì)胞貼壁較弱
細(xì)胞貼壁比較弱,，因此在遇到運(yùn)輸?shù)蜏丶罢鹗帯⑹覝仂o置太長(zhǎng)時(shí)間,、添加的培養(yǎng)基或其他試劑過(guò)冷,、密度較高、聚集未吹散,、加液吹打到細(xì)胞面等情況時(shí)會(huì)出現(xiàn)明顯的成片脫落現(xiàn)象,，此時(shí)若脫落現(xiàn)象不嚴(yán)重應(yīng)盡快放回培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，若呈大片脫落的情況時(shí)需要收集細(xì)胞重新消化吹散并接種,；
?建議使用經(jīng)過(guò)包被或者高貼壁培養(yǎng)瓶培養(yǎng)細(xì)胞,，盡量避免接觸低溫或密度過(guò)高,；
2、細(xì)胞本身偏嗜酸性,，消耗培養(yǎng)基較快
細(xì)胞在略微偏酸性的環(huán)境下生長(zhǎng)狀態(tài)會(huì)比偏堿性的好,，主意培養(yǎng)基pH控制；
細(xì)胞密度達(dá)到70%以上時(shí),，培養(yǎng)基消耗會(huì)很快,，主意及時(shí)觀察并換液；
3,、細(xì)胞很難生長(zhǎng)到匯合
細(xì)胞呈島狀生長(zhǎng),，生長(zhǎng)是逐漸向外發(fā)射狀增多,；
細(xì)胞基本無(wú)法生長(zhǎng)到鋪滿(mǎn)瓶底的情況,，很難達(dá)到常規(guī)意義上100%密度，密度過(guò)高的細(xì)胞很容易死亡或者脫落,，因此建議在70-80%時(shí)就要傳代細(xì)胞,；
細(xì) 胞 收 貨 攻 略
常溫細(xì)胞：
1. T25瓶收貨后，拆開(kāi)外包裝,，用75%酒精消毒T25瓶表面,，放37℃培養(yǎng)箱靜置2-4h；
2. 吸走大部分培養(yǎng)基并留10-12 ml,，顯微鏡下拍照保存細(xì)胞狀態(tài)照片,，觀察細(xì)胞密度，若細(xì)胞密度大于80%即可按比例傳代（傳代比例建議1：2）,，若細(xì)胞密度低于70%可以留10-12 ml繼續(xù)培養(yǎng)至細(xì)胞密度80%以上再進(jìn)行傳代培養(yǎng),；
凍存細(xì)胞 ：
1. 細(xì)胞收貨后盡快開(kāi)箱檢查，若干冰充足可以取出細(xì)胞迅速置于-80℃冰箱（2-3天內(nèi)復(fù)蘇）短期保存或液氮中長(zhǎng)期保存,，若干冰揮發(fā)建議立即復(fù)蘇細(xì)胞并聯(lián)系銷(xiāo)售人員解決,；
2. 凍存細(xì)胞建議盡快復(fù)蘇一管培養(yǎng)檢查，以免超出售后期,，復(fù)蘇步驟參考復(fù)蘇攻略,；
3. 復(fù)蘇一管細(xì)胞出現(xiàn)異常及時(shí)聯(lián)系銷(xiāo)售人員，在專(zhuān)業(yè)技術(shù)支持的指導(dǎo)下進(jìn)行下一步操作,；
Tips：
1. 細(xì)胞收貨出現(xiàn)漏液,、培養(yǎng)瓶破損、干冰揮發(fā)等異常情況時(shí),，及時(shí)拍照聯(lián)系銷(xiāo)售人員,；
2. 該細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，T25瓶運(yùn)輸過(guò)程中經(jīng)常出現(xiàn)大量細(xì)胞脫落并聚團(tuán)的情況,，細(xì)胞脫落建議按以下步驟處理：
收貨發(fā)現(xiàn)細(xì)胞脫落聚集,，可以將所有細(xì)胞收集起來(lái),，在50ml離心管內(nèi)離心，上清保存?zhèn)溆?，再用PBS重懸細(xì)胞,，盡量吹散后離心棄上清。
沉淀用1ml胰酶重懸,，放37度消化2min,，先輕輕吹散細(xì)胞，再加4ml左右培養(yǎng)基終止消化吹散細(xì)胞至無(wú)肉眼可見(jiàn)團(tuán)塊,，離心棄上清,，加第一步保存的培養(yǎng)基重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶。
由于貼壁較弱細(xì)胞消化時(shí)間本身較短,，注意必須控制消化時(shí)間和吹打力度,，避免細(xì)胞消化或吹打死亡過(guò)多導(dǎo)致無(wú)法正常貼壁生長(zhǎng)。
由于運(yùn)輸會(huì)脫落的細(xì)胞本身貼壁較弱,，建議使用高貼附培養(yǎng)瓶或提前包被過(guò)的培養(yǎng)瓶培養(yǎng)細(xì)胞,。
3. 尚恩生物T25瓶發(fā)貨的細(xì)胞內(nèi)含對(duì)應(yīng)細(xì)胞的培養(yǎng)基，可以收集原裝培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基經(jīng)1500rpm離心5min后,，取上清于4℃保存用于后續(xù)細(xì)胞培養(yǎng),；
細(xì) 胞 傳 代 攻 略
◎1. 先盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基，再加3-4ml 常溫PBS輕輕潤(rùn)洗細(xì)胞10-20s,，吸走潤(rùn)洗的PBS,；
◎2. T25瓶加1ml左右胰酶，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶以使胰酶鋪勻瓶底細(xì)胞層,，將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化,；
◎3. 消化到細(xì)胞間隙變大，但未脫落時(shí)加2-3ml培養(yǎng)基終止胰酶消化,；
◎4. 混勻細(xì)胞,，900rpm離心3-5min，棄上清,；
◎5. 加新的培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞,，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里，補(bǔ)足培養(yǎng)基,，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng),；
Tips：
1. 對(duì)于消化細(xì)胞程度，客戶(hù)如果經(jīng)驗(yàn)不多,，無(wú)法準(zhǔn)確掌控胰酶作用時(shí)間,，建議客戶(hù)按照下述操作：胰酶首先復(fù)溫到室溫后加入細(xì)胞，放入37度培養(yǎng)箱,，然后每隔30秒,，即吹打下細(xì)胞（此時(shí)吹打細(xì)胞應(yīng)盡量輕柔,，不能強(qiáng)行將細(xì)胞吹下，否則細(xì)胞可能出現(xiàn)機(jī)械損傷）,，如果能夠吹打散細(xì)胞,，說(shuō)明細(xì)胞消化完成可以終止消化，如果30秒吹打不下,，再等30秒重復(fù)操作直至能夠輕柔的吹下細(xì)胞,；LNCaP clone FGC細(xì)胞貼壁較弱，所以消化時(shí)間會(huì)比常規(guī)貼壁細(xì)胞短很多,，注意控制消化時(shí)間,；
2. T25瓶加10-12ml培養(yǎng)基，10cm皿加12-15ml,，2-3天換液一次,。
3. 細(xì)胞收貨后傳代建議按1：2傳代，后續(xù)培養(yǎng)可以視具體細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)和密度情況決定傳代比例,；
4. 傳代后24h建議觀察細(xì)胞并換液一次去除死亡細(xì)胞,；
細(xì) 胞 凍 存 攻 略
凍存步驟：
◎1. 先將細(xì)胞按傳代步驟消化,、離心,，至傳代步驟4，棄細(xì)胞上清,，獲得細(xì)胞沉淀,；
◎2. 加入適量預(yù)先配好的程序性?xún)龃嬉狠p輕重懸細(xì)胞，并將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至做好標(biāo)記的凍存管中,；
◎3. 將凍存管放入程序性?xún)龃婧?，放?80℃冰箱過(guò)夜；
◎4. 轉(zhuǎn)移細(xì)胞至液氮保存并登記細(xì)胞保存位置,，液氮保存24h后建議復(fù)蘇一管檢測(cè)凍存細(xì)胞的活性,，若活性合格即可長(zhǎng)期保存，若低于80%建議重新凍存,；
Tips：
1. 檢測(cè)凍存細(xì)胞活性結(jié)果未合格前,，培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)細(xì)胞建議繼續(xù)培養(yǎng)直至確認(rèn)凍存合格方可視需要丟棄；
2. 程序性?xún)龃嬉盒枰浜铣绦蛐詢(xún)龃婧惺褂?，若使用非程序凍存液可以按產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)處理降溫過(guò)程,；
3. T25培養(yǎng)瓶長(zhǎng)滿(mǎn)通常可以?xún)龃?-3管,，10cm皿長(zhǎng)滿(mǎn)可以?xún)龃?-4管,；
細(xì) 胞 復(fù) 蘇 攻 略
復(fù)蘇步驟：
◎1. 將所需的培養(yǎng)基放在培養(yǎng)箱預(yù)熱30min后開(kāi)始復(fù)蘇；
◎2. 準(zhǔn)備37度溫水,，將細(xì)胞從液氮罐取中出,，觀察管內(nèi)無(wú)液氮的情況下,，捏住管蓋，將細(xì)胞凍存部分浸入溫水輕輕搖晃,，融化至米粒大小冰塊,，終止水浴,；
◎3. 將凍存管以離心力150g(約900rpm)左右離心1-2min,，不同離心機(jī)具體轉(zhuǎn)速會(huì)有差異；
◎4. 離心完成后棄凍存液,，用剛才預(yù)熱的培養(yǎng)基緩慢加入凍存管,，并輕柔重懸細(xì)胞后接種至T25或者10cm皿中，輕輕混勻后放入培養(yǎng)箱,；
◎5.24h后觀察細(xì)胞并換液一次,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)；
Tips：
1. 凍存管在液氮長(zhǎng)期保存過(guò)程中難免滲入液氮,，取出細(xì)胞時(shí)震動(dòng)不要過(guò)大,，水浴前一定要觀察管內(nèi)是否存在液氮，若有液氮建議靜置一會(huì)待液氮蒸發(fā)后再水??；
2. 水浴時(shí)可以使用一次性PE手套包住凍存管避免直接接觸水源，可以降低管蓋縫隙滲入水導(dǎo)致污染的概率,；
3. 水浴至剩米粒大小時(shí)及時(shí)終止水浴,，避免過(guò)度水浴或水浴時(shí)間不足；
4. 建議水浴完成后直接在離心管內(nèi)離心細(xì)胞,，避免再次轉(zhuǎn)移細(xì)胞,；
5. 復(fù)蘇后的細(xì)胞比較脆弱，吹打和轉(zhuǎn)移細(xì)胞時(shí)盡量輕柔,，復(fù)蘇24h后換液去除死亡細(xì)胞,；
#常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案
01細(xì)胞密度怎么計(jì)算的？
嚴(yán)格意義上,，細(xì)胞密度需要收集細(xì)胞懸液計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)量,，但在實(shí)際培養(yǎng)過(guò)程中，并不需要為了精確控制細(xì)胞數(shù)量而消化細(xì)胞計(jì)數(shù),。因此,，常用的細(xì)胞密度指細(xì)胞相對(duì)于最大生長(zhǎng)密度的比值，貼壁細(xì)胞可以粗略的用細(xì)胞所占培養(yǎng)容器底面積百分比表示,，即顯微鏡下觀察培養(yǎng)容器底部,，有細(xì)胞的區(qū)域占總區(qū)域的百分比值，當(dāng)然這種表達(dá)方式受限于單個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)不同密度時(shí)所占面積不同導(dǎo)致并不嚴(yán)謹(jǐn),，但也是相當(dāng)直觀,、簡(jiǎn)便的表現(xiàn)細(xì)胞狀態(tài)的一種方式,；
02培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞碎片較多怎么處理？
1. 細(xì)胞內(nèi)的黑色顆粒是細(xì)胞外分泌泡及細(xì)胞器折光,，這個(gè)屬于細(xì)胞自身特性,，無(wú)法清除也無(wú)法改變，大部分細(xì)胞都會(huì)有這種現(xiàn)象,，只是不同細(xì)胞顆粒多少有區(qū)別,，細(xì)胞培養(yǎng)體系不適應(yīng)、營(yíng)養(yǎng)缺乏,、滲透壓異常等均可能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)顆粒增加,，建議使用合適的培養(yǎng)條件。
2. 細(xì)胞外的黑色顆粒大部分是細(xì)胞碎片和細(xì)胞代謝產(chǎn)物,，可以先吸走培養(yǎng)基后用PBS潤(rùn)洗清除,，再加新的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。潤(rùn)洗不能清除的可以換液清洗后等細(xì)胞密度70-80%左右消化處理細(xì)胞,，消化完成后加培養(yǎng)基終止消化,，混勻細(xì)胞，收集細(xì)胞懸液900-1000rpm(約150g)離心3min,，棄上清,。再加5ml PBS重懸細(xì)胞，再離心后,，用培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿,。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時(shí)碎片比較少,，傳代時(shí)可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多,，建議PBS多洗幾次,。
03細(xì)胞具體消化時(shí)間是多久？
每個(gè)客戶(hù)用的胰酶活力及消化步驟,、試劑都是不一樣的,，不能規(guī)定消化時(shí)間，以實(shí)際消化效果和客戶(hù)經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn),。
04細(xì)胞培養(yǎng)瓶是怎么包被的,？
細(xì)胞培養(yǎng)瓶包被方法有很多，例如多聚賴(lài)氨酸,、明膠,、鼠尾膠原等，不同的包被原理和效果都不太一樣,，具體可以根據(jù)實(shí)際實(shí)驗(yàn)室條件選擇合適的包被材料,。注意包被后應(yīng)及時(shí)使用,，包被后放的時(shí)間越長(zhǎng)效果越來(lái)越差的。
市面上也有特殊處理的培養(yǎng)瓶可以選擇,，常規(guī)TC處理或者corning的cellbind型號(hào)培養(yǎng)瓶都是不錯(cuò)的選擇,。
// 產(chǎn) 品 推 薦
【SNL-356】 LNCaP clone FGC(人前列腺癌細(xì)胞)
【SNLM-356】LNCaP clone FGC細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
會(huì)員.png)
5
立即詢(xún)價(jià)
您提交后,，專(zhuān)屬客服將第一時(shí)間為您服務(wù)