細(xì) 胞 基 本 信 息
▲SK-LU-1細(xì)胞正常生長(zhǎng)形態(tài)照片
--細(xì) 胞 基 本 信 息---
細(xì)胞名稱: SK-LU-1(人低分化肺腺癌細(xì)胞)
細(xì)胞別稱: SK-Lu-1; SK LU 1; SK-Lu1; SK-LU1; SKLU-1; SKLU1; SKLU01
細(xì)胞貨號(hào): SNL-229
生長(zhǎng)特性: 貼壁
培養(yǎng)條件: DMEM+10% FBS+1% P/S
培養(yǎng)環(huán)境: 空氣，95%,；二氧化碳 (CO2),，5%
細(xì)胞簡(jiǎn)介: SK-LU-1細(xì)胞來(lái)源于一名64歲患有肺腺癌（III級(jí)）的白人女性。SK-LU-1細(xì)胞在免疫耐受大鼠中是致瘤的,。SK-LU-1細(xì)胞支原體污染于1971年被發(fā)現(xiàn)并消除,，可以用于3D細(xì)胞培養(yǎng),。
細(xì) 胞 凍 存 攻 略
凍存步驟:
1、先將細(xì)胞按傳代步驟消化,、離心,，至傳代步驟4，棄細(xì)胞上清,，獲得細(xì)胞沉淀,；
2、加入適量預(yù)先配好的程序性凍存液輕輕重懸細(xì)胞,，并將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至做好標(biāo)記的凍存管中,；
3、將凍存管放入程序性凍存盒,，放入-80℃冰箱過(guò)夜,；
4、轉(zhuǎn)移細(xì)胞至液氮保存并登記細(xì)胞保存位置,，液氮保存24h后建議復(fù)蘇一管檢測(cè)凍存細(xì)胞的活性,，若活性合格即可長(zhǎng)期保存，若低于80%建議重新凍存,；
Tips：
◎1. 檢測(cè)凍存細(xì)胞活性結(jié)果未合格前,，培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)細(xì)胞建議繼續(xù)培養(yǎng)直至確認(rèn)凍存合格方可視需要丟棄；
◎2. 程序性凍存液需要配合程序性凍存盒使用,，若使用非程序凍存液可以按產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)處理降溫過(guò)程,；
◎3. T25培養(yǎng)瓶長(zhǎng)滿通常可以凍存2-3管,，10cm皿長(zhǎng)滿可以凍存3-4管,；
細(xì) 胞 復(fù) 蘇 攻 略
復(fù)蘇步驟:
1、將所需的培養(yǎng)基放在培養(yǎng)箱預(yù)熱30min后開(kāi)始復(fù)蘇,；
2,、準(zhǔn)備37度溫水，將細(xì)胞從液氮罐取中出,，觀察管內(nèi)無(wú)液氮的情況下,，捏住管蓋，將細(xì)胞凍存部分浸入溫水輕輕搖晃,，融化至米粒大小冰塊,，終止水浴,；
3,、將凍存管以離心力150g(約900rpm)左右離心1-2min，不同離心機(jī)具體轉(zhuǎn)速會(huì)有差異,；
4,、離心完成后,，棄凍存液，用剛才預(yù)熱的培養(yǎng)基緩慢加入凍存管,，并輕柔重懸細(xì)胞后接種至T25或者10cm皿中,。
Tips：
◎1. 凍存管在液氮長(zhǎng)期保存過(guò)程中難免滲入液氮，取出細(xì)胞時(shí)震動(dòng)不要過(guò)大,，水浴前一定要觀察管內(nèi)是否存在液氮,，若有液氮建議靜置一會(huì)待液氮蒸發(fā)后再水浴,；
◎2. 水浴時(shí)可以使用一次性PE手套包住凍存管避免直接接觸水源,，以降低管蓋縫隙滲入水導(dǎo)致污染的概率；
◎3. 水浴至剩米粒大小時(shí)及時(shí)終止水浴,，避免過(guò)度水浴或水浴時(shí)間不足,；
◎4. 建議水浴完成后直接在離心管內(nèi)離心細(xì)胞，避免再次轉(zhuǎn)移細(xì)胞,；
◎5. 復(fù)蘇后的細(xì)胞比較脆弱,，吹打和轉(zhuǎn)移細(xì)胞時(shí)盡量輕柔，復(fù)蘇24h后換液去除死亡細(xì)胞,；
#常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案
一,、細(xì)胞密度怎么計(jì)算的？
嚴(yán)格意義上,，細(xì)胞密度需要收集細(xì)胞懸液計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)量,，但在實(shí)際培養(yǎng)過(guò)程中，并不需要為了精確控制細(xì)胞數(shù)量而消化細(xì)胞計(jì)數(shù),。因此,，常用的細(xì)胞密度指細(xì)胞相對(duì)于最大生長(zhǎng)密度的比值，貼壁細(xì)胞可以粗略的用細(xì)胞所占培養(yǎng)容器底面積百分比表示,，即顯微鏡下觀察培養(yǎng)容器底部,，有細(xì)胞的區(qū)域占總區(qū)域的百分比值，當(dāng)然這種表達(dá)方式受限于單個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)不同密度時(shí)所占面積不同導(dǎo)致并不嚴(yán)謹(jǐn),，但也是相對(duì)直觀,、簡(jiǎn)便的表現(xiàn)細(xì)胞狀態(tài)的一種方式,；
二,、培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞碎片較多怎么處理？
1. 細(xì)胞內(nèi)的黑色顆粒是細(xì)胞外分泌泡及細(xì)胞器折光,，這個(gè)屬于細(xì)胞自身特性,，無(wú)法清除也無(wú)法改變，大部分細(xì)胞都會(huì)有這種現(xiàn)象,，只是不同細(xì)胞顆粒多少有區(qū)別,，細(xì)胞培養(yǎng)體系不適應(yīng),、營(yíng)養(yǎng)缺乏、滲透壓異常等均可能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)顆粒增加,，建議使用合適的培養(yǎng)條件,。
2. 細(xì)胞外的黑色顆粒大部分是細(xì)胞碎片和細(xì)胞代謝產(chǎn)物，可以先吸走培養(yǎng)基后用PBS潤(rùn)洗清除,，再加新的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。潤(rùn)洗不能清除的可以換液清洗后等細(xì)胞密度70-80%左右消化處理細(xì)胞，消化完成后加培養(yǎng)基終止消化,，混勻細(xì)胞,，收集細(xì)胞懸液900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清,。再加5ml PBS重懸細(xì)胞,，再離心后，用培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿,。第二次PBS重懸是為了去除碎片,，如果平時(shí)碎片比較少，傳代時(shí)可以省略PBS重懸的步驟,；如果碎片很多,，建議PBS多洗幾次。
三,、細(xì)胞具體消化時(shí)間是多久,？
每個(gè)客戶用的胰酶活力及消化步驟、試劑都是不一樣的,，不能規(guī)定消化時(shí)間,，以實(shí)際消化效果和客戶經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn)。
文 獻(xiàn) 引 用
Title:
USP5-Beclin 1 axis overrides p53-dependent senescence and drives Kras-induced tumorigenicity
Journal: Nature Communications
Date: 2022/12/23
Product name： SK-LU-1(人低分化肺腺癌細(xì)胞)
產(chǎn) 品 推 薦
【SNL-492】SK-LU-1(人低分化肺腺癌細(xì)胞)
【SNLM-492】SK-LU-1細(xì)胞專用培養(yǎng)基
【SNT-001】0.25%胰酶（不含EDTA）
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