原代細胞培養(yǎng)問題：
1、原代細胞與細胞系有什么區(qū)別,？
根據(jù)傳統(tǒng)定義,，自組織第一次收獲和接種的細胞被稱為原代細胞 [Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 這類細胞直接從組織分離，生命周期有限,，經(jīng)數(shù)次傳代后會逐漸停止生長,。原代細胞在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細胞的最大生長空間，以保持細胞群中基因型和表型的一致性,。
細胞系是不斷生長,、分化的細胞群,，因其經(jīng)過遺傳改造，致使其具有無限增長的潛能,。體外生長的細胞系用于醫(yī)療或科研,。
但實際上，經(jīng)過長時間,、連續(xù)的傳代培養(yǎng)后,，細胞系隨著代數(shù)的增加，細胞的基因型和表型都有可能發(fā)生改變,。
需要指出的是,，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群,，除非細胞經(jīng)過了遺傳改造,。
2、倍增和代數(shù)有什么區(qū)別,？
倍增是培養(yǎng)物中細胞總數(shù)的翻倍,，通常是指細胞指數(shù)或?qū)?shù)生長期。代數(shù)是指細胞群從培養(yǎng)瓶中移出,，傳代培養(yǎng)過程的次數(shù),，傳代培養(yǎng)的目的，是使細胞處于低密度以刺激其進一步生長,。
3,、接收到的凍存細胞該如何處理？
收到包裝箱后,，立即將凍存細胞從干冰移入液氮中凍存,。此過程盡量快，以避免升溫,。不要將細胞儲存在-80℃,，這樣會對細胞造成不可挽回的傷害。
4,、凍存的細胞該如何開始培養(yǎng),？
(1) 將一管細胞從液氮罐中取出，注意保護手和眼睛,。
(2) 將凍存管快速的放入37℃水浴中,，輕輕握住并旋轉(zhuǎn)，直到管內(nèi)物體*融化,。
(3) 將凍存管立即從水浴中拿出,，擦干，轉(zhuǎn)入無菌環(huán)境,。
(4) 用70%的酒精沖洗凍存管,，然后擦去多余酒精,。
(5) 打開蓋子，注意手指不要碰到里面的螺紋(注意,，由于凍存管有負壓,，開蓋時可能會有少量溢出，這是正?，F(xiàn)象),。
(6) 用多聚賴氨酸(或參照說明書)包被培養(yǎng)瓶。多數(shù)細胞推薦的接種密度為每平方厘米5000個細胞,。
(7) 蓋好培養(yǎng)瓶的蓋子，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以使細胞分布均勻,。若需要氣體交換可打開蓋子,。
(8) 將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱中(37℃，5%CO2,，95%空氣)
(9) 放入培養(yǎng)箱后第6-16小時更換一次培養(yǎng)基,，以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細胞。
5,、細胞培養(yǎng)過程中,，多久更換一次培養(yǎng)基？
這取決于細胞生長的速度,。一般而言2-3天更換一次培養(yǎng)基,，許多細胞培養(yǎng)實驗室通常在周一，周三,，周五更換培養(yǎng)基,。
注意：凍存細胞復蘇后，在6-16小時內(nèi)更換培養(yǎng)基,，以去除殘留的二甲基亞楓和死亡的細胞,。
6、我能擴增培養(yǎng)和再次凍存原代正常人類細胞嗎,？
這取決于細胞的類型,。一些細胞類型像神經(jīng)細胞，神經(jīng)膠質(zhì)細胞和一些生長緩慢的上皮細胞,，不推薦擴增培養(yǎng)和再次凍存,。其它的細胞類型像成纖維細胞、星形細胞,、腎系膜細胞,、星形膠質(zhì)細胞等等，可以擴增培養(yǎng)和再次凍存,。
然而,，需要注意的是再次凍存的過程可能導致細胞生長性能的改變,。
7、培養(yǎng)瓶中應該加入多少體積的培養(yǎng)基,？
我們推薦的用量為：T-25培養(yǎng)瓶5ml,，T-75培養(yǎng)瓶15ml，T-150培養(yǎng)瓶30ml,。
5
立即詢價
您提交后,，專屬客服將第一時間為您服務