原代細(xì)胞培養(yǎng)問題：
1,、原代細(xì)胞與細(xì)胞系有什么區(qū)別,？
根據(jù)傳統(tǒng)定義,，自組織第一次收獲和接種的細(xì)胞被稱為原代細(xì)胞 [Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 這類細(xì)胞直接從組織分離，生命周期有限,，經(jīng)數(shù)次傳代后會逐漸停止生長,。原代細(xì)胞在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細(xì)胞的最大生長空間，以保持細(xì)胞群中基因型和表型的一致性,。
細(xì)胞系是不斷生長,、分化的細(xì)胞群，因其經(jīng)過遺傳改造,，致使其具有無限增長的潛能,。體外生長的細(xì)胞系用于醫(yī)療或科研。
但實(shí)際上,，經(jīng)過長時間,、連續(xù)的傳代培養(yǎng)后，細(xì)胞系隨著代數(shù)的增加,，細(xì)胞的基因型和表型都有可能發(fā)生改變,。
需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同,。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群,，除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造,。
2,、倍增和代數(shù)有什么區(qū)別？
倍增是培養(yǎng)物中細(xì)胞總數(shù)的翻倍,，通常是指細(xì)胞指數(shù)或?qū)?shù)生長期,。代數(shù)是指細(xì)胞群從培養(yǎng)瓶中移出，傳代培養(yǎng)過程的次數(shù),，傳代培養(yǎng)的目的,，是使細(xì)胞處于低密度以刺激其進(jìn)一步生長。
3,、接收到的凍存細(xì)胞該如何處理,？
收到包裝箱后，立即將凍存細(xì)胞從干冰移入液氮中凍存,。此過程盡量快,，以避免升溫。不要將細(xì)胞儲存在-80℃,，這樣會對細(xì)胞造成不可挽回的傷害,。
4、凍存的細(xì)胞該如何開始培養(yǎng),？
(1) 將一管細(xì)胞從液氮罐中取出,，注意保護(hù)手和眼睛,。
(2) 將凍存管快速的放入37℃水浴中，輕輕握住并旋轉(zhuǎn),，直到管內(nèi)物體*融化,。
(3) 將凍存管立即從水浴中拿出，擦干,，轉(zhuǎn)入無菌環(huán)境,。
(4) 用70%的酒精沖洗凍存管，然后擦去多余酒精,。
(5) 打開蓋子,，注意手指不要碰到里面的螺紋(注意，由于凍存管有負(fù)壓,，開蓋時可能會有少量溢出,，這是正常現(xiàn)象),。
(6) 用多聚賴氨酸(或參照說明書)包被培養(yǎng)瓶,。多數(shù)細(xì)胞推薦的接種密度為每平方厘米5000個細(xì)胞。
(7) 蓋好培養(yǎng)瓶的蓋子,，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以使細(xì)胞分布均勻,。若需要?dú)怏w交換可打開蓋子。
(8) 將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱中(37℃,，5%CO2,，95%空氣)
(9) 放入培養(yǎng)箱后第6-16小時更換一次培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細(xì)胞,。
5,、細(xì)胞培養(yǎng)過程中，多久更換一次培養(yǎng)基,？
這取決于細(xì)胞生長的速度,。一般而言2-3天更換一次培養(yǎng)基，許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一,，周三,，周五更換培養(yǎng)基。
注意：凍存細(xì)胞復(fù)蘇后,，在6-16小時內(nèi)更換培養(yǎng)基,，以去除殘留的二甲基亞楓和死亡的細(xì)胞。
6,、我能擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存原代正常人類細(xì)胞嗎,？
這取決于細(xì)胞的類型。一些細(xì)胞類型像神經(jīng)細(xì)胞,，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和一些生長緩慢的上皮細(xì)胞,，不推薦擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存,。其它的細(xì)胞類型像成纖維細(xì)胞、星形細(xì)胞,、腎系膜細(xì)胞,、星形膠質(zhì)細(xì)胞等等，可以擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存,。
然而,，需要注意的是再次凍存的過程可能導(dǎo)致細(xì)胞生長性能的改變。
7,、培養(yǎng)瓶中應(yīng)該加入多少體積的培養(yǎng)基,？
我們推薦的用量為：T-25培養(yǎng)瓶5ml，T-75培養(yǎng)瓶15ml,，T-150培養(yǎng)瓶30ml,。
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