raw264.7細胞源自Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤。sIg-,Ia-抗原,、Thy-1.2表面抗原陰性,。此細胞株不分泌可檢測到的病毒顆粒,XC斑點形成試驗陰性,??梢园嬛行约t并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖??梢钥贵w依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細胞,。LPS或PPD處理2天可誘導分解紅血球但對腫瘤靶細胞無作用。
raw264.7細胞培養(yǎng)經(jīng)驗:
1.基本情況:小鼠來源白血病毒誘導腫瘤細胞,,屬于巨噬細胞,,貼壁生長。下圖是ATCC來源,。主流觀點是以橢圓圓形細胞為主,,激活分化后才有觸角。
形態(tài)以類圓形和不規(guī)則為主,,一般1--2個核,,極少數(shù)有3個核,胞漿伸展時胞體較大,。鏡下細胞為小珍珠似的圓形橢圓形,。
2.培養(yǎng)情況
培養(yǎng)條件:10%FBS+高糖DMEN,進口gibco血清更好
傳代:細胞增殖較快,,70%即可傳代,,細胞有觸角也提示需要傳代,1:3----1:6傳代,,推薦使用皿,。傳代時切記不要使用胰酶,正常情況下此細胞貼壁不牢,,直接吹打即可,,胰酶消化會使細胞伸出觸角改變形態(tài)。我是直接用培養(yǎng)基吹打,,也可以用PBS,,感覺無差異。這個細胞增殖較快,,培養(yǎng)基消耗快容易變黃,,要勤換液。
凍存和復蘇:和普通細胞無異。
raw264.7細胞作為巨噬細胞有很強的吞噬能力,,吞噬抗原后伸出長角,,就是大家常見的偽足。同時貼壁黏附能力增強,,傳代時難以消化下來,。該細胞貼壁時間短,成片生長,,似小菌落般小片生長,,連成一片并會疊層。傳代密度不易過高或者過低,,過低會導致細胞生長緩慢甚至不生長,,過高,,細胞會長出偽足,。
3.關(guān)于RAW264.7分化,正常細胞為貼壁不牢的圓形橢圓形細胞,,分化后伸出偽足,,貼壁能力增強。
避免方法:
1,,血清建議采用進口的真血清,,
2,密度不要太高或者太低,,傳代時切不可拖延時間,,
3,傳代時切不可胰酶消化,,直接吹打就能下來,,
4,不要污染,,包括其他細胞株的污染,。
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