293細(xì)胞是轉(zhuǎn)染腺病毒E1A基因的人腎上皮細(xì)胞系,，293T細(xì)胞由293細(xì)胞派生,，同時表達(dá)SV40大T抗原，含有SV40復(fù)制起始點(diǎn)與啟動子區(qū)的質(zhì)?？梢詮?fù)制。用Ca3(PO4）2轉(zhuǎn)染效率可高達(dá)50%,。蛋白表達(dá)水平高,，轉(zhuǎn)染后2-3天用堿性磷酸酶分析可較容易地檢測到表達(dá)的蛋白。瞬時轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞是過表達(dá)蛋白并獲得細(xì)胞內(nèi)及細(xì)胞外（分泌的或膜）蛋白的便捷方式,。
通常轉(zhuǎn)染效率與代數(shù)相關(guān),，建議選擇代數(shù)低的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。如果質(zhì)粒中含SV40復(fù)制起始點(diǎn),，可以選擇293T或293T/17,。這些細(xì)胞貼壁不牢，特別是溫度低于30攝氏度時很容易卷曲脫落,，建議使用Cellbind細(xì)胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng),。
293細(xì)胞培養(yǎng)特性：
1、293細(xì)胞明顯適應(yīng)酸性環(huán)境,pH值在6.9～7.1時,可順利貼壁生長,換液時動作要輕,。一般用高糖的DMEM培養(yǎng)基,。
2、傳代：倒去廢液,，PBS洗一次（輕）,，用0.02%EDTA與0.25%Trypsin消化，生長良好細(xì)胞,，培養(yǎng)瓶中輕搖,使之流遍所有細(xì)胞表面,即將其吸除或棄去消化30s,，然后吸去，再讓剩下的EDTA/Trypsin作用30s,鏡下觀察細(xì)胞變圓,就可加DMEM終止消化,，反復(fù)吹打至細(xì)胞全成單個懸浮細(xì)胞即可,。12小時-24小時90%以上細(xì)胞貼壁,。293細(xì)胞傳代時機(jī)為達(dá)80-90%匯合，傳代比例為1：3,。
3,、293細(xì)胞在低代時容易貼壁，生長良好,，在傳到幾十代以后,，易聚集成團(tuán)，且貼壁不牢,，用PBS沖洗時即可能脫落,，即使消化后也不容易吹打成單細(xì)胞懸液，購入時先大量凍存,。
4,、復(fù)蘇：293細(xì)胞的另一生長特性是貼壁所需時間長且貼壁不牢。細(xì)胞冷凍后復(fù)蘇時,都有不同程度的腫脹,若以50ml培養(yǎng)瓶待細(xì)胞長滿瓶底的70%～80%時消化凍存,復(fù)蘇時將其全部接種至2個50ml瓶中時較為合適,。剛復(fù)蘇的293貼壁很慢,，復(fù)蘇接種后24小時內(nèi),應(yīng)盡量減少觀察細(xì)胞次數(shù)或不作觀察,以免因晃動而影響細(xì)胞貼壁。復(fù)蘇后48小時左右觀察貼壁情況并進(jìn)行更換培養(yǎng)基比較合適,如果用一次性塑料培養(yǎng)瓶可增加細(xì)胞貼壁牢度,。換液前宜將培養(yǎng)基預(yù)熱,。
5
立即詢價
您提交后,，專屬客服將第一時間為您服務(wù)